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您所在的位置: 需求库 技术需求 非共价结合蛋白的毛细管电泳纯度分析

非共价结合蛋白的毛细管电泳纯度分析

发布时间: 2022-11-28
来源: 科技服务团
截止日期:2023-11-28

价格 双方协商

地区： 上海市 市辖区 闵行区

需求方： 上海***公司

行业领域

生物与新医药技术

需求背景

促卵泡激素是一种糖蛋白，糖分子约占总分子量的25％，包括唾液酸、甘露糖、氨基己糖、半乳糖、海藻二糖等。其活性形式是糖基化的异源二聚体，由α和β两条多肽链组成。如果用酶使唾液酸分离，促卵泡激素的作用就丧失。该分子两条链之间靠非共价键结合，因此其热稳定性较差，传统的CE-SDS检测方法需要通过通过加热使蛋白变性，而这一过程会破坏链间非共价键，影响检测结果。

需解决的主要技术难题

1. 传统CE-SDS方法会破坏蛋白完整性，影响检测结果；          2. 非共价结合蛋白的非还原CE-SDS中加入烷基化试剂的必要性；                                           3. 样品缓冲液pH值会影响蛋白稳定性；                 

期望实现的主要技术目标

1. 保证蛋白样品在CE-SDS检测体系中的完整性；                                   2. 验证烷基化试剂在链间非共价结合蛋白样品中的必要性；                 3. 确认样品检测的最佳pH范围；                 

需求解析

解析单位：“科创中国”生物医药产业科技服务团（中国微生物学会） 解析时间：2022-11-29

张伟

甲贝医药

CEO

综合评价

本项目的需求非常清晰，即保证非共价结合蛋白在毛细管电泳纯度检测（CE-SDS）体系中的完整性。具体开展如下： 1. 传统的CE-SDS采用高温加热的方法破坏蛋白的空间结构，并在毛细管通道中分离线性蛋白分子。而非共价结合蛋白由于其分子结构的特殊性，热稳定性差，加热会破坏蛋白完整性。因此，首先需要排查样品孵育温度的影响，参照平台方法的70℃孵育条件，分别设置常温、70℃、100℃三个条件，分析纯度检测结果，判断不同温度下样品是否完整； 2. 另外，平台方法中非还原纯度检测体系中加入了烷基化试剂，其能与含有丰富电子的基团（如氨基，巯基，羟基，羧基、磷酸基等）发生共价结合，使其丧失活性，因此一般用来保护蛋白分子的二硫键不被破坏，从而维持结构完整。而非共价结合蛋白的特殊性在于其链间不含二硫键，而烷基化试剂不会影响非共价键的稳定性，基于外源添加物尽量少的原则，探究了烷基化添加与否对于样品检测结果的影响； 3. 缓冲液的pH值是影响蛋白结构稳定性的重要因素之一，可能会导致蛋白分子断裂形成碎片或者造成分子间聚集，影响纯度检测结果，参照蛋白分子的等电点，分别制备不同pH样品缓冲液，通过碎片峰与聚体峰的比
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处理进度

  1. 提交需求
    2022-11-28 17:43:49
  2. 确认需求
    2022-11-28 17:45:56
  3. 需求服务
    2022-11-28 17:50:33
  4. 需求签约
  5. 需求完成
服务方

“科创中国”生物医药产业科技服务团