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粉纹夜蛾转座酶活性检测方法开发

发布时间: 2022-11-28
来源: 科技服务团
截止日期:2023-11-28

价格 双方协商

地区: 上海市 市辖区 闵行区

需求方: 上海***公司

行业领域

生物与新医药技术

需求背景

从反应缓冲液、反应条件与酶失活条件三方面建立能使PB酶(piggyBac Transposase,纹夜蛾转座酶)体外发挥酶切活性的条件,并使用相应检测设备与方法定量测定酶活,建立完整的酶活检测方法,为其应用提供方法分析支持

需解决的主要技术难题

主要通过调节缓冲液组分、pH、酶用量等因素寻找能使PB酶充分发挥活性的反应条件,且由于PB酶复杂的酶切位点与作用形式需克服定量测定酶活的方法挑战

期望实现的主要技术目标

1):稳定的酶切反应条件;2):准确的酶活定量方法;

需求解析

解析单位:“科创中国”生物医药产业科技服务团(中国微生物学会) 解析时间:2022-11-29

张伟

甲贝医药

CEO

综合评价

本项目的需求非常清晰,即对粉纹夜蛾转座酶开发定量检测酶活的方法,主要分为两步进行: 1. 稳定的酶切反应体系。粉纹夜蛾转座酶属于DDE重组酶超家族,其作用位点成对出现,两个位点分别有一个由13bp和19bp的TIR序列组成的亚末端重复序列,且两端TIR序列之间的间隔分别是3bp(5’端)和31bp(3’端),因此需要制备含有两个位点的质粒。通过文献调研寻找潜在的反应条件并加以尝试以获得稳定的酶切体系与条件。 2. 定量酶活采用检测产物残留量的方式进行,在固定的酶切体系中反应完成后通过AEX或者qPCR方法检测未被酶切的残留底物DNA含量,使用酶活定义计算出酶活。为其应用提供分析方法支持。
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处理进度

  1. 提交需求
    2022-11-28 17:31:44
  2. 确认需求
    2022-11-28 17:33:09
  3. 需求服务
    2022-11-28 17:51:42
  4. 需求签约
  5. 需求完成