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您所在的位置: 需求库 技术需求 质粒DNA的PolyA长度分布精确测定

质粒DNA的PolyA长度分布精确测定

发布时间: 2022-11-28
来源: 科技服务团
截止日期:2022-11-29

价格 双方协商

地区： 上海市 市辖区 浦东新区

需求方： 和元***公司

行业领域

生物与新医药技术

需求背景

质粒模板制备是mRNA技术中最上游的部分，一个好的模板对于IVT反应合成mRNA的产量和纯度以及体内表达效果是至关重要的。当前通过大肠杆菌发酵的方式来大规模生产治疗性质粒是最成熟的工艺路线。但是，由于质粒上长片段 PolyA序列很容易在细菌培养过程中发生丢失，无法实现生产的质粒PolyA序列的均一性，这对于GMP级别生产工艺和药品监管要求来说，都是难以接受的，因此对质粒PolyA序列的长度进行表征也是监控mRNA质量的一种方式。

需解决的主要技术难题

寻求基于质谱的方式检测快速鉴定质粒DNA的PolyA长度分布。质谱鉴定过程中面临的挑战有：1.分析序列并选择合适的酶切位点以获得完整的PolyA片段；2.探索合适的富集DNA片段Poly A片段的方法。3.根据所选方法确定富集样品体系；***富集纯化过程中样品用量以及缓冲液的组分；***洗脱过程中洗脱液的选择。

期望实现的主要技术目标

1）选择合适的酶切位点以获得目标获得DNA Poly A片段   

2）选择合适的富集DNA Poly A片段的方法；          

3）对DNA的PolyA长度分布进行精准测定；

4） 根据不同需求选择分段式DNA的PolyA尾地完整测定或者分段测定。

需求解析

解析单位：“科创中国”生物医药产业科技服务团（中国微生物学会） 解析时间：2022-12-01

张伟

甲贝医药

CEO

综合评价

本项目的需求非常清晰，即对质粒DNA的PolyA长度分布进行精确测定。首先分析DNA片段Poly A片段5’端上游及3’端下游的基因序列并选择合适的酶切位点, 利用酶切以获得完整的PolyA片段。对于切下来的PolyA片段，需要探索富集DNA片段Poly A片段的最佳方法以获得纯的片段。根据所选方法确定富集样品所用体系，包括DNA Poly A片段的用量、富集所用物料的量、富集体系中缓冲液的组分；对于富集得到的DNA Poly A片段，需要探索洗脱所用的buffer 组分，及洗脱DNA Poly A片段的方式，以期待最终获得含量和纯度满足质谱分析的DNA Poly A片段。最后优化液相和质谱参数，以期待获得DNA Poly A片段的精确长度分布信息。
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处理进度

  1. 提交需求
    2022-11-28 17:29:48
  2. 确认需求
    2022-11-29 11:12:27
  3. 需求服务
    2022-11-29 11:53:36
  4. 需求签约
  5. 需求完成
服务方

“科创中国”生物医药产业科技服务团