行业领域

农、林、牧、渔业,农业

需求描述

1.服务需求背景:

蓖麻(RicinuscommunisL.)为大戟科蓖麻属双子叶一年生或多年生草本植物，是世界十大油料作物之一，具有显著的种植价值与工业价值。蓖麻种植遍布世界各地，其中以印度、中国及巴西等国家种植面积最为广泛。蓖麻品种繁多，截止到2011年11月，我国蓖麻种植资源数据库保存有1430个蓖麻品种，随着育种技术的进步，新蓖麻品种也不断涌现。品种的繁多给品种鉴定工作带来一定困难。目前，常用来进行种质资源鉴定的方法主要有形态学鉴定、同工酶标记与分子标记技术，其中种子形态鉴定是根据种子的外部形态特征，借助放大镜、解剖镜等进行观察，与标准样品或鉴定图片及有关资料进行比较，判别真假种子。该法简单、快速、方便、直观，但准确性不高。同工酶标记是利用品种之间同工酶的进化差异而对品种进行鉴定，但其鉴别效果在某些作物尤其是在蓖麻品种鉴定上并不显著，存在蓖麻品种间亲缘较近及传统鉴定方法中分级标准不统一、准确性低、费时费力等缺陷。常规的田间种植鉴定，培养幼苗需3w左右，在此期间，影响因素较多，因而结果准确性低。

2.服务需求具体内容:

1.一种利用双分子标记鉴定蓖麻种子品种真实性的方法，其特征在于：步骤如下：(1)提取蓖麻种子基因组DNA：(2)以步骤(1)获得的基因组DNA为模板进行AP‑PCR扩增，引物见序列1；(3)对步骤(2)获得的AP‑PCR扩增产物进行凝胶电泳；(4)以步骤(1)获得的基因组DNA为模板进行RMAPD扩增，引物见序列2和序列3；(5)对步骤(4)获得的RMAPD扩增进行聚丙烯酰胺凝胶电泳；(6)将未知品种的电泳条带与已知品种数据库进行比对，判断蓖麻种子品种的真实性。

2.根据权利要求1所述的利用双分子标记鉴定蓖麻种子品种真实性的方法，其特征在于：所述AP‑PCR扩增的体系和程序如下：体系：在25μL扩增体系中，含2×***μL，50mMMgCl21μL，10mM引物序列11μL，模板DNA20ng，用超纯水补足剩余体积至25μL；扩增程序：两个循环94℃5min，35℃5min，72℃5min，40个循环94℃1min，50℃1min，72℃2min，72℃2min，最后72℃10min。

3.根据权利要求1所述的利用双分子标记鉴定蓖麻种子品种真实性的方法，其特征在于：所述RMAPD扩增的体系和程序如下：在25μLRMAPD体系中：含2×***μL，10mM引物序列1和10mM引物序列3各1μL，模板DNA20ng，超纯水补足至总体积***μL；PCR程序：95℃预变性4min，40个循环，94℃变性30s→55℃退火30s→72℃延伸45s→94℃变性30s→36℃退火60s→72℃延伸90s→72℃延伸10min；

3.具体的服务需求完成后所要达到的标准或效果:

(1)本发明采用AP‑PCR及RMAPD双分子标记法筛选与鉴定蓖麻种子品种真实性与纯度，本方法将实验室常规的PCR技术与电泳技术相结合，从取样到检测完成只需7h左右，且周年都可以进行，简单易行、快速灵敏、结果准确。

(2)本发明利用AP‑PCR及RMAPD分子标记法筛选与鉴定蓖麻种子品种，仅对蓖麻遗传物质DNA进行检测，无需大田鉴定，与其他实验室技术相比，可大大提高鉴定准确性，节约成本，仅为传统表型鉴定成本的十分之一左右，检测方便、重复性好。

(3)本发明所提供的利用双分子标记鉴定蓖麻种子品种真实性的试剂盒，将检测引物与相关试剂组合在一起，操作方便，检测结果稳定可靠，结合常规的分子生物学设备，按提供的操作程序进行实际检测，易于实现标准化，对几十份样品进行检测，其检测时间仅需7‑8h，提高了检测效率与标准化程度。

4.发明人

王昌禄;何东;叶锋;王玉荣;陈勉华;李风娟;李贞景;杨朝晖;李伟

联系人：宋巍；刘胜斌

联系电话：022-60600153；022-60600161

处理进度