本发明公开了一种癫痫动物模型及应用。包括如下步骤:S1:获取受孕雌性动物,确认是否受孕;S2:在雌性动物受孕第0.7天,实行体内输卵管壶腹部注射基因编辑复合物的操作;S3:电转输卵管壶腹部,用电极镊夹持输卵管壶腹部,电击,电击结束,归位输卵管。本发明的方法突破了原有的以体外方式递送基因编辑复合物至受精卵的技术局限,采取体内递送基因编辑复合物至受精卵的方式,达到精简操作方法、减少动物使用、提高癫痫动物模型制备效率的目的。
1.一种癫痫动物模型的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1:获取受孕雌性动物,确认是否受孕;
S2:在雌性动物受孕第0.7天,实行体内输卵管壶腹部注射基因编辑复合物的操作;
S3:电转输卵管壶腹部,用电极镊夹持输卵管壶腹部,电击,电击结束,归位输卵管。
2.根据权利要求1所述的递送方法,其特征在于,所述步骤S1具体包括:获取受孕雌性动物,发情期雌性动物和雄性动物提前一天晚上合笼,第二天上午检栓确认是否受孕。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤S1具体包括:获取受孕雌性动物,发情期雌性动物和雄性动物提前一天晚上6点合笼,第二天上午9点检栓确认是否受孕。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤S1具体包括:以阴道涂片的方式,以显微镜下可见精子即判定为受孕。
在癫痫动物模型的制备中,如何有效递送基因编辑复合物至受精卵,使基因编辑复合物发挥编辑功能,是癫痫动物模型能否成功制备的重要因素。以往技术大部分采用体外递送的方式,如显微注射、体外电转受精卵等,这些体外递送的方式牵涉到多个步骤,如超数排卵获取雌性动物卵子、获取雄性动物精子、体外受精获取受精卵、受精卵体外培养、体外递送基因编辑复合物至受精卵、获取假孕受体雌性动物、移植已编辑的受精卵至假孕受体动物等,这些步骤不仅操作繁琐,且需要经验丰富的操作人员,做大量工作。
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与现有技术相比,本发明达到了以下技术效果:
1、本发明的制备方法不需要超数排卵雌性动物,结扎雄性动物,不需要代孕动物,减少实验过程动物使用数量,符合动物福利。
2、本发明的制备方法不需要体外培养受精卵,不需要移植已编辑受精卵至代孕动物,进一步精简手术程序,减少动物创伤;同时由于极大简化了操作流程,因此更容易被实验人员掌握。
3、本发明的制备方法避免了直接刺破受精卵,破坏受精卵结构,有效降低了直接刺破受精卵注射所带来的细胞损伤,提高受精卵存活效率。
4、本发明的制备方法简化操作流程,更容易被掌握,因此可提高实验效率,有效缩短获取基因编辑动物所需时间,提高转基因动物的制备效率。
技术合作
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。