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本发明涉及一种海洋弧菌及其在制备热稳定特性的ι-卡拉胶酶中的应用，海洋细菌Vibrio ***08，菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号CCTCC No：M2018769，保藏日期2018年11月27日，保藏地址中国武汉市武汉大学。本发明所述的ι-卡拉胶酶为重组表达工程菌株纯化所得，具有热稳定特性，在40℃的活性半衰期长达6.5h，30℃的活性半衰期长达42h，具备工业化应用潜质。

本发明的目的是提供一种海洋弧菌，海洋细菌Vibrio ***08，菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号CCTCC No：M2018769，保藏日期2018年11月27日，保藏地址中国武汉市武汉大学。本发明的目的之二是提供上述海洋细菌Vibrio ***08在制备具有热恢复特性的ι-卡拉胶酶CgiV中的应用。优选的：上述海洋细菌Vibrio ***08的基因序列在制备具有热恢复特性的ι-卡拉胶酶CgiV中的应用。双酶切处理的PCR产物和pET-22b(+)质粒载体参照DNA连接酶说明书进行连接反应；连接产物转化至大肠杆菌DH5α菌株，涂布在Luria-Bertani(LB)培养基固体平板上，含有50μg/mL氨苄青霉素的，37℃温箱中培养12-16小时后，挑取单克隆；将单克隆转接至LB液体培养基中，含有50μg/mL氨苄青霉素，转速为180rpm的37℃摇床中培养过夜，将单克隆进行序列测定，选择阳性克隆，并将其命名为pET22b-CgiV，重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)，将重组大肠菌株命名为BL21(DE3)/pET22b-C

卡拉胶是由1,4-α-D-吡喃半乳糖和1,3-β-D-吡喃半乳糖作为基本骨架，交替连接而成的硫酸线性多糖。根据是否含有3,6-内醚半乳糖结构以及硫酸基的含量的不同，目前工业上生产和使用的卡拉胶主要为ι-型、ι-型和λ-型三种，其二糖单元分别含有1个、2个和3个硫酸基。卡拉胶寡糖作为一种富含硫酸基的硫酸酯化糖类物质，具有广泛的抗病毒、抗肿瘤、降血脂、免疫调节和抗凝血等生物活性。

卡拉胶降解酶是一种糖水解酶，通过断裂卡拉胶的β-1,4糖苷键将大分子卡拉胶降解为寡糖的酶。ι-卡拉胶酶是指专一性降解ι-卡拉胶的卡拉胶酶，传统的ι-卡拉胶酶是从海洋细菌的发酵液上清中直接分离提取，受限于天然ι-卡拉胶酶产量低，发展基因工程的ι-卡拉胶酶势在必行。并且大多数报道的ι-卡拉胶酶热稳定和热恢复性较差，容易失活，无法达到工业化应用的要求。因此，寻找具有特殊性质的ι-卡拉胶酶具有重要意义。

此技术是青岛大学李尚勇研发，青岛大学，位于山东省青岛市。培养高等学历人才，促进科技文化发展。

与现有技术相比，此技术产生的有益效果：

1.本发明的ι-卡拉胶酶CgiV为结构与功能新颖的ι-卡拉胶酶，归属于多糖水解酶第82家族(GH82)，其氨基酸序列与已有的ι-卡拉胶酶序列相似度为88％。

2.本发明提供了一种制备ι-卡拉胶酶CgiV的方法，即利用基因工程的技术方法，将CgiV的基因序列异源重组表达到大肠杆菌，经摇瓶发酵后，发酵液酶活力达到37.9U/mL。该酶纯化方法简单，利用镍柱对其进行一步亲和纯化，回收率高达88.6％，蛋白质纯度高达98.2％。

3.本发明的ι-卡拉胶酶CgiV具有优良的理化性质，具有热稳定特性，在50℃的活性半衰期长达0.7h，在40℃的活性半衰期长达6.5h，30℃的活性半衰期长达42h。降解产物分析，该酶降解主产物为ι-卡拉胶二糖和四糖。

综上所述，本发明所述的ι-卡拉胶酶CgiV具有良好的工业化应用前景。

技术转让，许可，合作所需资金需双方协商，此项技术想尽快落地保定，希望具备此项技术研发的技术方，能够尽快承接此项目。