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本发明提供一种胰蛋白酶的检测方法，包括以下步骤：检测金属纳米簇的荧光强度；将胰蛋白酶与金属纳米簇反应，得到反应产物，检测所述反应产物的荧光强度；计算所述金属纳米簇的荧光强度与所述反应产物的荧光强度的差值，根据所述差值与预定的标准曲线，得到胰蛋白酶的含量。本发明提供的检测方法以金属纳米簇为荧光探针，所述金属纳米簇包括蛋白质和金属，利用胰蛋白酶对金属纳米簇的荧光淬灭性质，而且荧光淬灭的程度与胰蛋白酶的浓度正相关

一种胰蛋白酶的检测方法，包括以下步骤：检测金属纳米簇的荧光强度；将胰蛋白酶与金属纳米簇反应，得到反应产物，检测所述反应产物的荧光强度；计算所述金属纳米簇的荧光强度与所述反应产物的荧光强度的差值，根据所述差值与预定的标准曲线，得到胰蛋白酶的含量。，采用荧光分光光度法对对胰蛋白酶的含量进行测定。本发明提供的检测方法准确度高、灵敏度高、选择性好，实验结果表明，本发明提供的检测方法对胰蛋白酶检测的灵敏度为1.0×10-9g/mL。

蛋白酶能够催化水解靶蛋白中的特异性肽键，涉及调控重要的生理、病理过程。胰蛋白酶是一种由胰腺分泌的水解酶，可将肽链中赖氨酸和精氨酸残基的羧基端切断，胰蛋白酶在医药、食品及工业生产中均有应用，能溶解变形蛋白质，对未变性的蛋白质无作用，能使脓液、痰液、血凝块等分解、变稀，加速创面净化，还有抗炎的作用；临床上用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤、瘘管等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等；胰蛋白酶在促进其他胰腺酶原活化，控制胰腺外分泌功能中具有重要作用；胰蛋白酶的升高是急性酒精性胰腺炎最准确的指示器；胰蛋白酶的缺乏或变异将会引起胎粪性肠梗塞、遗传性胰腺炎等胰腺疾病。因此胰蛋白酶的检测在健康、医药和食品质量控制中具有重要的作用。

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本发明的胰蛋白酶检测方法利用蛋白质或多肽包被金属形成核-壳型纳米颗粒，既作为胰蛋白酶作用的底物，又作为颜色变化的指示剂，未加入胰蛋白酶时，溶液显示的为核-壳型纳米颗粒的颜色，当与胰蛋白酶混合后，核-壳型纳米颗粒表面的蛋白质被水解，核-壳型纳米颗粒结构被破坏，金属核心暴露并发生聚集，形成金属纳米粒子，溶液的颜色发生变化，核-壳型纳米颗粒的颜色变浅，金属纳米粒子的颜色得到显现，利用这两种颜色吸光值的比值表征核-壳型纳米颗粒的减少量，即蛋白质被水解的量，即也表征胰蛋白酶的含量。

[0022] 本发明的有益效果在于，本发明提供的胰蛋白酶检测方法操作简单，且无需对探针进行修饰或标记。

技术合作

反应后的溶液在不同波长下吸光值的变化，对比例I和对比例2在530nm处吸光值最大，没有发生金属团聚，核_壳型纳米颗粒表面的多聚赖氨酸没有被水解；而实施例5在600nm处吸光值最大，实施例5发生了金属团聚，赖氨酸被胰蛋白酶水解，对比例I中多聚赖氨酸不能被BSA水解，说明本发明的检测方法对胰蛋白酶有特异性。

[0087] 以上所述的本发明实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何在本发明的精神和原则之内所作的修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的权利要求保护范围之内。