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本发明公开了一种检测乳腺癌HER2基因表达量的方法及其检测试剂盒。本发明所提供的试剂盒包括(1)抗体稀释缓冲液，(2)孵育缓冲液，(3)联吡啶钌标记的HER2单克隆抗体的溶液，(4)无镉量子点的水溶液。所述的抗体稀释缓冲液为磷酸与NaCl混合配置的磷酸-NaCl缓冲液；所述的孵育缓冲液为所述的抗体稀释缓冲液与胎牛血清混合。实验证明，本发明的检测乳腺癌HER2基因表达量的方法操作简单，灵敏度高，精确度好。

1.一种检测乳腺癌HER2基因表达量的量子点免疫荧光试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括：(1)抗体稀释缓冲液；(2)孵育缓冲液；(3)联吡啶钌标记的HER2单克隆抗体的溶液，浓度为1×10-6mol/L-2×10-6mol/L；(4)ZnSe/ZnS核/壳量子点的水溶液，所述的抗体稀释缓冲液为磷酸-NaCl缓冲液；所述的孵育缓冲液为磷酸-NaCl-胎牛血清缓冲液。

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，是威胁女性健康的"头号杀手"。随着人们 生活方式的改变，乳腺癌的发病率也呈逐年递增之势。每年全球约有140万女性罹患乳腺 癌，更有40万女性死于乳腺癌。根据美国癌症协会2012发布的美国癌症统计预期数据来 看，乳腺癌高居女性恶性肿瘤发病率第一位，占所有新发女性恶性肿瘤的29%。在我国，近 年来乳腺癌发病率也呈逐年递增的趋势。从1982年到2001年，女性乳腺癌发病率增加了 91%。近期北京、上海、天津等大城市的统计数据显示，乳腺癌已成为我国女性最常见的恶 性肿瘤，且发病率呈逐年上升趋势，每年新增打3 % -4%，超过世界水平1-2 %，每年有20余 万妇女患乳腺癌，发病率为女性易患肿瘤第一位。

中国科学院深圳先进技术研究院提升了粤港地区及我国先进制造业和现代服务业的自主创新能力，推动我国自主知识产权新工业的建立，成为国际一流的工业研究院。 深圳先进院目前已初步构建了以科研为主的集科研、教育、产业、资本为一体的微型协同创新生态系统，由九个研究平台，国科大深圳先进技术学院，多个特色产业育成基地、多支产业发展基金、多个具有独立法人资质的新型专业科研机构等组成。开展先进技术研究，促进科技发展。信息、电子、通讯技术研究新材料、新能源技术研究高性能计算、自动化、精密机械研究生物医学与医疗仪器研究相关学历教育、博士后培养与学术交流。

本发明还提供了一种用所述的试剂盒检测乳腺癌HER2基因表达量方法，具体步 骤如下：

[0021] (1)用抗体稀释缓冲液稀释联吡啶钌标记的HER2单克隆抗体的溶液；

[0022] (2)将待测细胞加入步骤（1)得到的溶液中，再加入孵育缓冲液，室温条件下联吡 啶钌标记的HER2单克隆抗体与待测细胞表面的HER2基因表达蛋白发生特异性的结合反 应，将特异性结合反应完毕的溶液低速离心，离心后收集上清液；

[0023] (3)将步骤（2)所得上清液加入无镉量子点的水溶液中，在365nm下观察无镉量子 点荧光，并用荧光光谱仪测定无镉量子点荧光强度或在620-650nm下观察联吡啶钌荧光， 并用荧光光谱仪测定联吡啶钌荧光强度。

[0024] 优选地，所述的联吡啶钌标记的HER2单克隆抗体与所述的无镉量子点摩尔比为 1 : 20-1 : 7.5。

[0025] 优选地，步骤（2)中特异性的结合反应的时间为30-60min。

[0026] 优选地，步骤（2)中低速离心的离心力为500_800g。

[0027] 本发明的有益效果在于，第一，本发明中使用的量子点为无镉量子点，减少了对环 境的污染；第二，本发明无需对量子点进行修饰，简化了操作步骤；第三，本发明的检测方 法及试剂盒实现了对乳腺癌HER2基因表达量的检测，灵敏度好，精确度高。

技术合作

随着BT474细胞数量的增加，ZnSe/ZnS核/壳量子点荧光强度 增加，将细胞数量作为横坐标，ZnSe/ZnS核/壳量子点荧光强度作为纵坐标做散点图（图 5)，1-9组BT474细胞数量的增加导致ZnSe/ZnS核/壳量子点荧光强度增加的趋势明显，当 BT474细胞数量达到10000个后，细胞数量的增加并没有导致ZnSe/ZnS核/壳量子点荧光 强度值的增加，由此可知在BT474细胞数量为10000个时，联吡啶钌标记的HER2单克隆抗 体被全部结合，达到检测的上限值，将1-9组以细胞数量作为横坐标，ZnSe/ZnS核/壳量子 点荧光强度作为纵坐标做图（图6)，BT474细胞数量与ZnSe/ZnS核/壳量子点荧光强度呈 线性，说明在检测限内，HER2基因表达量与ZnSe/ZnS核/壳量子点荧光强度具有良好的线 性关系，本发明的检测方法精确度好。本发明的检测方法灵敏度可达到102个细胞，灵敏度 商。

[0089] 以上所述的本发明实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何在本发明 的精神和原则之内所作的修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的权利要求保护范 围之内。