基于双荧光染料标记的适配体检测赭曲霉毒素A的方法
成果类型:: 发明专利
发布时间: 2023-08-01 15:22:51
本发明提供检测赭曲霉毒素A的探针,其特征在于,所述探针包括赭曲霉毒素A的适配体和两种荧光染料标记,所述荧光染料标记位于所述适配体的两端,所述适配体的序列为GAT CGGGTG TGG GTG GCG TAAAGG GAG CAT CTx,其中X为选自0至10的整数,所述两种荧光染料标记在空间靠近时能够发生荧光共振能量转移。本发明还提供了赭曲霉毒素A的检测方法。这种检测方法具有诸多优点,在均相溶液中进行,不需要分离、不需要固定分子、检测快速、信号稳定、操作简单、灵敏度高等。
本发明构建了一种双荧光染料标记的适配体用于分析OTA。我们在可结合OTA的适配体序列的两端分别标记荧光素(FAM)染料和四甲基罗丹明(TMR)染料,作为检测OTA的荧光探针。检测OTA时,将适配体荧光探针与OTA温育,然后在FAM的激发波长下,测量FAM和TMR的荧光强度,采用TMR的荧光强度和FAM的荧光强度的比值(FTMR/FFAM)作为检测信号用于OTA的检测。所构建的荧光标记适配体与OTA结合前后,荧光强度比值检测信号(FTMR/FFAM)产生显著的变化,可实现检测OTA。这种比率型的荧光检测模式可克服单纯依赖荧光强度变化检测方法信号容易波动的局限。
本成果可以实现对赭曲霉毒素A的检测,检测限为61pM。这种检测方法具有诸多优点,在均相溶液中进行,不需要分离、不需要固定分子、检测快速、信号稳定、操作简单、灵敏度高等优势,在多个领域具有应用前景。
实验室现有固定人员24人,包括中国工程院院士1人,研究员6人,副研究员6人,助理研究员10人,学术秘书2人。研究生和博士后44人。
本发明提供具有双荧光染料标记的适配体,可实现利用两个荧光染料的荧光强度的比值信号来检测赭曲霉毒素A。在可高亲和力、高选择性识别赭曲霉毒素A的适配体的两端分别修饰荧光素(FAM)和四甲基罗丹明(TMR)两种荧光染料,作为荧光探针。同一激发波长下,分别测定四甲基罗丹明的荧光强度和荧光素的荧光强度,采用四甲基罗丹明的荧光强度和荧光素的荧光强度的比值作为检测信号。该探针与赭曲霉毒素A结合前后,相应的荧光强度比值信号产生明显变化,可实现对目标分子赭曲霉毒素A的检测。在优化的实验条件下,可以实现对赭曲霉毒素A的检测,检测限为61pM。这种检测方法具有诸多优点,在均相溶液中进行,不需要分离、不需要固定分子、检测快速、信号稳定、操作简单、灵敏度高等优势。
本科技成果支持技术服务等多种方式,有针对性进行指导转化。