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建立检测美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒并能同时对高致病性蓝耳病进行鉴别诊断的寡核营酸芯片方法以及猪瘟病毒基因分型寡核普酸芯片方法‚将基因芯片技术用于两种疫病的诊断与流行病学研究。针对寡核普酸芯片方法‚本研究的设计思路是利用美洲型的通用探针及高致病性鉴别探针‚通过样品与芯片探针杂交‚在检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的同时区分高致病性毒株对于猪瘟病毒基因分型寡核普酸芯片方法。通过比较猪瘟病毒个基因群共个基因亚群毒株的基因序列‚设计并筛选灵敏度高、与其他亚群样品无交叉杂交的探针‚将荧光标记的样品与芯片杂交来判定样品中猪瘟病毒所属的基因亚群

设计寡核苷酸探针20条。 在芯片制备实验中优化了点样缓冲液、点样探针浓度及探针固定的最佳时间,确定以博奥生物有限公司生产的基因芯片点样液作为探针点样液,最佳点样探针浓度为50μmol/L,点样后于室温固定72小时探针的固定效果最好。 分别以经典美洲型PRRSV和高致病性PRRS样品的cDNA为模板建立了同时扩增美洲型毒株保守序列及Nsp2基因片段的二重PCR荧光标记方法。经过探针的杂交筛选及杂交缓冲液优化,共筛选出4条美洲型毒株通用探针、4条区分经典美洲型毒株与高致病性PRRSV的鉴别探针,建立了猪繁殖与呼吸综合征病毒芯片检测方法。

样品与芯片杂交均呈现各亚群特异的杂交图谱,从杂交图谱可以准确鉴别各样品所属的基因亚群。 高通量和可用于鉴别诊断的检测手段对于疫病的诊断和流行病学研究具有重要意义。目前,以寡核苷酸芯片方法进行猪瘟病毒基因分型检测以及高致病性PRRSV鉴别诊断的研究尚未见报道。本研究建立的猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒寡核苷酸芯片方法经初步应用表明,其在高致病性PRRS的鉴别诊断与猪瘟病毒基因分型中显示了一定的应用潜力。虽然基因芯片技术在病原体检测领域的研究已大量报道,但目前多数仍处于研究阶段,相信随着技术、设备的不断发展和研究的深入,基因芯片技术将会被广泛用于病原体的检测。

郭焕成，男，吉林四平，军事医学科学院军事兽医研究所预防兽医学专业，农学博士，军事医学科学院军事兽医研究所助理研究员，著作有：高致病性变异株和经典毒株基因芯片鉴别方法的建立，猪瘟病毒基因分型寡核普酸芯片方法的建立，猪瘟病毒感染猪外周血白细胞凋亡及旷和淋巴细胞亚群的变化。

对临床疑似样品的检测表明‚芯片探针能够准确检测出样品中的猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸并能区分高致病性毒株。本研究为猪繁殖与呼吸综合征病毒检测及当前高致病性猪繁殖与呼吸综合征的鉴别诊断和流行病学研究提供了新的手段。样品检测实验表明‚本方法能够快速、准确的鉴别我国流行的猪瘟病毒亚群，显示出一定的应用潜力。

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