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本发明公开了一种细胞荧光标记方法，将点击化学与荧光量子点技术相结合，通过点击化学修饰连接剂，使用纳米量子点对细胞进行荧光标记。该方法由于使用点击化学，使量子点与生物体共价连接，快速简便，且标记产物稳定，特异性好。基于活体细胞的荧光标记，或活体荧光成像技术不需要杀死动物，可以对同一个 动物进行长时间反复跟踪成像，既可以提高数据的可比性，避免个体差异对试验结果的影 响。更重要的是，该技术可以得到直观的成像图片，了解标记物在动物体内的分布和代谢情 况，避免了传统的体外实验方法的诸多缺点，特别是在在癌症细胞转移及干细胞相关研究、 药物制剂学、药物临床前研究中有不可估量的应用前景。

一种细胞荧光标记方法，包括以下步骤： A. 使细胞与点击化学修饰连接剂结合：在含有A549肺癌细胞或RAMOS淋巴瘤细胞的 DMEM培养液中，添加带有环炔基的点击化学修饰连接剂，室温反应30分钟，得到细胞-点击 化学修饰连接剂复合培养液，用pH为7. 2-7. 6的缓冲液洗涤，以去除多余的点击化学修饰 连接剂，并离心收集细胞，其中点击化学修饰连接剂的量为细胞摩尔量的10-100倍； B. 使用叠氮-荧光量子点复合物对细胞进行荧光标记：将叠氮-荧光量子点复合物加 入步骤A得到的培养液中，室温孵育30分钟，得到荧光量子点标记的生物体培养液，用pH 为7. 2-7. 6的缓冲液洗涤，以去除多余的叠氮-荧光量子点复合物，并离心收集荧光量子点 标记的细胞，其中叠氮-突光量子点复合物的量为细胞摩尔量的10-100倍

探索和发现生物体内及生命过程中蛋白质、核酸、多肽等重要生物分子的高灵敏 分析检测方法，是生物医学领域研究的热点和难点。生物标记技术是该领域不可或缺的研 究手段。通用的生物标记方法可以分为放射性标记、显色标记、酶标记和荧光标记等。其中， 荧光标记备受科研人员关注，而其检测灵敏度很大程度上取决于荧光标记探针的发光强度 和光化学稳定性。

[0003] 荧光半导体纳米材料量子点具有激发光谱宽而连续、发射光谱窄而对称、发光效 率高、光化学稳定性好、不易发生光漂白、发射光颜色与粒径大小关联等优点，作为一种新 型突光标记物被广泛应用于蛋白质及DNA检测、细胞标记成像、活细胞生命动态过程示踪、 活体动物体内肿瘤细胞祀向示踪等生物医学领域。

中国科学院深圳先进技术研究院提升了粤港地区及我国先进制造业和现代服务业的自主创新能力，推动我国自主知识产权新工业的建立，成为国际一流的工业研究院。 深圳先进院目前已初步构建了以科研为主的集科研、教育、产业、资本为一体的微型协同创新生态系统，由九个研究平台，国科大深圳先进技术学院，多个特色产业育成基地、多支产业发展基金、多个具有独立法人资质的新型专业科研机构等组成。开展先进技术研究，促进科技发展。信息、电子、通讯技术研究新材料、新能源技术研究高性能计算、自动化、精密机械研究生物医学与医疗仪器研究相关学历教育、博士后培养与学术交流。

[0023] 本发明利用点击化学的方法，将荧光量子点以共价的方式结合到细胞上，荧光标 记稳定、高效，并且能够保持被标记物的活性。并且本发明的方法操作简便，快速易行，为细 胞等生物体的长时间观察研究提供了适宜的实验方法。

技术合作

以上所述本发明的具体实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何根据 本发明的技术构思所作出的各种其他相应的改变与变形，均应包含在本发明权利要求的保 护范围内。