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高产细菌素的副干酪乳杆菌基因工程菌株的构建方法，涉及一种副干酪乳杆菌基因工程菌株的构建方法。本发明是要解决现有副干酪乳杆菌的细菌素产量低的问题。方法：一、从副干酪乳杆菌HD1.7中扩增prcK基因；二、构建质粒pMD18?T?prcK；三、构建重组过表达载体pRSFDuet?1?prcK；四、构建重组过表达载体pRR?tet；五、将过表达载体pRR?tet电转化副干酪乳杆菌HD1.7感受态细胞；六、prcK基因过表达突变株的筛选和鉴定。该基因工程菌株的抑菌能力比原始菌株提高了17.86％。传代后发酵液细菌素效价2373.46±46.27AU/mL，传代后效价比较稳定。本发明用于产细菌素。

本发明构建了prcK基因过表达基因工程菌株，利用电转化方法转入了感受态细胞中，通过荧光定量PCR方法测定突变株prcK基因的mRNA表达水平时发现，prcK基因过表达菌株均比原始菌株的基因表达量高；利用SDS-PAGE和Westernblot分析检测过表达菌株相应基因蛋白的表达时发现，在50kDa处出现目的条带，为prcK基因编码的组氨酸蛋白激酶，而原始菌株在相应位置未出现条带。同时prcK基因过表达菌株分别比原始菌株蛋白表达提高119.37％，较预期(110％)提高了9.37％，其抑菌能力比原始菌株提高了17.86％。传代后发酵液细菌素效价为2373.46±46.27AU/mL，传代后效价比较稳定，说明菌株具有良好的遗传稳定性。本发明关于基因过表达基因工程菌株的构建的研究将为今后基因功能的研究和细菌素的生产提供理论了依据。

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率在女性恶性肿瘤中局第二位，仅在宫颈癌之后。我国每年新发病例为13.15万，占全世界新发病例的28.8%，居我国妇科恶性肿瘤之首位。近年来，宫颈癌的发病率和死亡率有逐年增长的趋势，且呈现年轻化趋势。放射治疗既是中晚期宫颈癌的首选治疗方法，也是早期宫颈癌术后辅助治疗的主要手段，而宫颈腺癌对放疗的敏感性却低于鳞癌。Ⅰ～ⅣA 期宫颈腺癌行单纯放疗，其局部复发率为 38%，同期宫颈鳞癌复发率则为15%。因此，如何预测和提高宫颈腺癌细胞对放疗的敏感性，从而有效提高宫颈癌的治疗效果，已成为人们研究的热点。 本研究通过real time-PCR、Westernblot法及免疫组织化学方法检测DLL4蛋白在宫颈癌组织及正常宫颈组织中的表达并分析DLL4与宫颈癌临床病理学参数的关系以及其表达水平与宫颈癌患者预后的关系，初步了解DLL4与宫颈癌发生发展、侵袭转移及预后的相关性。得到以下结论：DLL4在宫颈癌中的表达明显高于正常宫颈腺癌组织，且DLL4与宫颈癌的TNM分期、淋巴结转移以及复发密切相关，同时通过生存分析本实验结果提示DLL4呈高表达的患者其总生存及无进展生存均低于低表达者。同时通过细胞体外实验研究发现抑制表达后，宫颈癌Hela细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力均明显下降。 本课题的研究成果将为宫颈癌的发生、发展研究提供新的线索，为宫颈癌

黑龙江大学（Heilongjiang University），位于黑龙江省哈尔滨市，是黑龙江省人民政府和中华人民共和国教育部、国家国防科技工业局共建的省属综合性大学，黑龙江省“双一流”建设国内一流大学A类高校，入选国家卓越法律人才教育培养计划、中西部高校基础能力建设工程、特色重点学科项目、国家建设高水平大学公派研究生项目、中国政府奖学金来华留学生接收院校、全国深化创新创业教育改革示范高校、教育部来华留学示范基地，是世界翻译教育联盟、中俄新闻教育高校联盟、中俄综合性大学联盟、上海合作组织大学、“一带一路”智库合作联盟成员单位。

1课题来源与背景： 甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤之一，甲状腺癌临床上多表现为甲状腺结节,占甲状腺结节的5%～15%。成人中，通过临床检查或超声检测在甲状腺结节的发病率高达19％～67％，尸检甲状腺结节的阳性率则可发现高达50％。甲状腺癌首选手术治疗。鉴于甲状腺结节的高发病率，而甲状腺恶性肿瘤仅占其中极小部分，又难以在术前进行明确的诊断，这往往导致两种不良后果。如能首先通过非手术方式识别出尽可能多的甲状腺癌，则可大幅度减少不必要的诊断性手术数量，减少手术给病人带来的损伤。 2研究目的与意义： 本研究应用甲状腺细针穿刺细胞学检查技术，对let-7 microRNA实时荧光定量PCR分析，研究不同甲状腺癌组织类型中的表达，分析与基因BRAF和RAS及RET/ PTC突变表达关系，深入探讨let-7 miRNA在甲状腺癌发生中的重要意义。使let-7 miRNA成为新的基因诊断标记物以及基因治疗靶点，为甲状腺癌的综合治疗提供新的治疗策略，不仅能提高治疗效果，又可更合理地应用有限的医疗资源。 3主要论点与论据： 目前为止有关miRNA let-7在甲状腺癌乃至于其他肿瘤中作用的研究仍然处于基础研究层面，鉴于miRNA相对于以往的肿瘤标志物有上述诸多优势，并且出于对miRNA let-7在甲状腺癌的诊断以及治疗方面有巨大潜力的认识，我们认为miRNA

技术转让、合同、入股均可，具体资金双方协商，希望尽快落地实现产业化。