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本发明公开了一种半固体筛选培养基，每40mL半固体筛选培养基由如下成分组成：0.8mL的50×HAT贮存液、10mL的胎牛血清、0.4mL的100×青霉素和链霉素的双抗溶液、0.16mL的1mol/L的L-谷氨酰胺溶液、0.5mL的1mmol/L的β-巯基乙醇溶液、0.4mL的100×异硫氰酸素标记的兔抗鼠二抗溶液以及余量的甲基纤维素半固体培养基。本发明还公开了一种采用上述半固体筛选培养基的杂交瘤细胞的筛选方法，融合细胞在半固体培养基上呈集落生长，彼此分离，每个克隆由单个细胞形成，避免了不分泌抗体的杂交瘤生长很快而影响分泌抗体的杂交瘤细胞的生长，与传统的有限稀释法相比，筛选效率较高。

一种半固体筛选培养基，其特征在于，每40mL所述半固体筛选培养基由如下成分组成:0.8mL的50XHAT贮存液、10mL的胎牛血清、0.4mL的100X青霉素和链霉素的双抗溶液、0.16mL的lmol/L的L-谷氨酰胺溶液、0.5mL的lmmol/L的β -巯基乙醇溶液、0.4mL的100X异硫氰酸素标记的兔抗鼠二抗溶液以及余量的甲基纤维素半固体培养基； 所述甲基纤维素半固体培养基由按照体积比为1:1的2X1640培养基和4%的甲基纤维溶液充分混匀得到； 所述2X1640培养基通过如下操作制备:将10.4g的1640培养基干粉、lgNaHC03、0.055g丙酮酸钠加入500mL的超纯水充分搅拌溶解，接着调节pH值为7.0〜7.4，最后通过0.22 μ m滤膜过滤除菌，得到所述2X 1640培养基。

单克隆抗体技术的基本原理是将分泌抗体但不能长期培养的B细胞与能在体外长期培养的骨髓瘤细胞进行杂交，筛选得到的杂交瘤细胞既能分泌抗体又有骨髓瘤细胞无限增殖的特性，由一个杂交瘤细胞繁殖、分泌的抗体称为单克隆抗体，它只针对一个抗原表位。细胞融合时，B细胞是从抗原免疫的动物的脾脏中分离出来的，骨髓瘤细胞是经过诱变和筛选得到的缺陷型，其本身不能分泌抗体；并且是次黄嘌呤鸟嘌呤核苷酸转移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶激酶(TK)的缺陷型，不能在含有次黄嘌呤(hypoxanthine H)、氨基蝶呤(aminopterin, A)、胸腺啼啶(thymidine T)的筛选培养基(HAT)中存活。在融合后的细胞群中，未融合的脾细胞和相互融合的脾细胞，不能连续培养，只能在培养基中存活几天，而未融合的骨髓瘤细胞和融合的骨髓瘤细胞因缺乏HGPRT不能在HAT培养基中存活，只有骨髓瘤细胞与脾细胞形成的杂交瘤细胞能在HAT培养基中存活下来，所以杂交瘤能正常地生长繁殖而被选择出来。

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有必要提供一种筛选效率较高的半固体筛选培养基以及杂交瘤细胞的筛选方法。

[0006] —种半固体筛选培养基，每40mL所述半固体筛选培养基由如下成分组成:0.8mL的50XHAT贮存液、10mL的胎牛血清、0.4mL的100X青霉素和链霉素的双抗溶液、0.16mL的lmol/L的L-谷氨酰胺溶液、0.5mL的lmmol/L的β -巯基乙醇溶液、0.4mL的100 X异硫氰酸素标记的兔抗鼠二抗溶液以及余量的甲基纤维素半固体培养基；

[0007] 所述甲基纤维素半固体培养基由按照体积比为1:1的2X 1640培养基和4%的甲基纤维溶液充分混匀得到。

这种杂交瘤细胞的筛选方法采用半固体筛选培养基，融合细胞在半固体培养基上呈集落生长，彼此分离，每个克隆由单个细胞形成，避免了不分泌抗体的杂交瘤生长很快而影响分泌抗体的杂交瘤细胞的生长，与传统的有限稀释法相比，筛选效率较高。

技术合作

这种杂交瘤细胞的筛选方法，融合细胞在半固体培养基上呈集落生长，彼此分离，每个克隆由单个细胞形成，因此不需要反复克隆即能获得纯一的抗体。培养基中加入了荧光标记二抗，一步实现杂交瘤细胞的克隆和阳性筛选，工作量小、耗时短；可根据荧光强度判断细胞分泌抗体的能力，从而得到高分泌抗体的细胞株；半固体培养基中加入了 B细胞刺激因子和杂交瘤细胞融合克隆因子，保证了杂交瘤细胞的营养需要，避免了使用饲养细胞的繁琐操作，大大降低了污染危险。