一种microRNA的核酸信号放大器及其应用
成果类型:: 发明专利
发布时间: 2023-01-13 16:31:10
本发明公布了一种microRNA的核酸信号放大器及其应用,涉及到生命分析化学技术领域。该方法主要有3步:电极修饰、microRNA识别和信号放大。首先利用含巯基的捕获探针ssDNA修饰金电极,然后,探针ssDNA特异性识别靶标分子microRNA,最后,靶标microRNA触发发卡结构DNA,引发核酸自组装反应,实现信号的放大。本方法较传统分析方法具有更高的灵敏度和特异性,操作简单和快速。
.一种microRNA的核酸信号放大器及其应用,该方法主要有3步完成,电极修饰、microRNA识别和信号放大,主要特征包含如下步骤:(1)电极修饰 将一定量水加入至DNA干粉离心管中,配置成0.1-3 µmol/L的巯基捕获探针DNA水溶液;取200 μL的巯基捕获探针DNA水溶液置于500 μL离心管中,然后,将金电极浸泡其中,25 ℃下静置10-12 h,取出电极并清水清洗3次,巯基DNA修饰到电极表面;再次采用1 mM的巯基己醇浸泡电极; (2)microRNA检测 分别配制不同浓度的microRNA和NaCl的水溶液,二者按一定比例混合,其混合溶液中microRNA浓度依次为10-10至10-6 M,NaCl浓度均为80 mM;该溶液浸泡(1)所得电极15-30 min,反应温度为25 ℃,实现microRNA的特异性识别; (3)检测信号放大 分别配制不同浓度的两种发卡结构DNA和NaCl的水溶液,其混合溶液中DNA浓度依次为10-9至10-5 M,NaCl浓度为80 mM;该溶液浸泡(2)所电极15-30 min,反应温度为25 ℃,microRNA信号放大
目前,针对microRNA的检测方法主要有Northern Blot、基因芯片、荧光定量探针法、微球的流式细胞术技术、酶辅助循环扩增的信号放大法。Northern Blot方法敏感度高、操作复杂,耗时长,且RNA的用量较大,不适合高通量分析;基因芯片技术能够进行microRNA的高通量分析,即在一块芯片上同时检测多个microRNA,但缺点是结果准确性和重复性有待进一步提高,特异性的识别性能有待改善;荧光定量探针法检测灵敏度高,但检测费用昂贵;微球的流式细胞术技术将探针固定于微球上并置于液相中,更有利于捕捉microRNA序列,但其灵敏性和选择性不佳;酶辅助循环扩增的信号放大方法需要酶的参与,操作复杂。因此,发展一种方便、快捷和高灵敏microRNA的检测方法具有重要意义。
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本发明的优点和有益效果在于:(1)本发明中检测的microRNA方法中,设计的捕捉探针针对特定的microRNA序列,探针对靶标具有特异性的识别功能,因此,该检测方法可以对microRNA进行特异性识别;
(2)本发明中靶标microRNA可有效触发信号放大器发卡型结构核酸H1展开,进一步引发H1和H2的自组装反应,因此,该方法可实现microRNA的超灵敏检测;
(3)本发明操作简单、方便、省时。
本技术具有较强的财务盈利能力,其财务净现值良好,投资回收期合理。综上所述,该技术属于国家鼓励支持的项目,技术的经济和社会效益客观,技术的投产将改善优化当地产业结构,实现高质量发展的目标。技术转让,许可,合作所需资金需双方协商,此项技术想尽快落地保定,希望具备此项技术研发的技术方,能够尽快承接次项目.