一种响应缺铁胁迫的诱导型启动子GmbHLH47启动子及其应用,属于基因工程技术领域。为了提高植物的抗铁胁迫能力,本发明提供了一种响应缺铁胁迫的诱导型启动子GmbHLH47启动子,该启动子从大豆GmbHLH47基因启动子区域克隆得到,核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。通过对该启动子区的分析发现其中含有多种可能参与多重逆境胁迫的顺式作用元件。当用缺铁培养基对转基因植株进行处理后,发现GmbHLH47启动子可以增加外源基因GUS的表达,致使转基因植株的染色加深,证明GmbHLH47启动子受缺铁胁迫诱导。作为一个受缺铁胁迫诱导的启动子,其启动子区域和上游调控序列在基因工程和提高植物抵抗缺铁方面起着重要作用。
(1)构建含有GmbHLH47启动子的重组载体,所述GmbHLH47启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;
(2)制备携带GmbHLH47启动子的农杆菌:将步骤(1)得到的重组载体转入到农杆菌感受态中培养,得到携带GmbHLH47启动子的农杆菌;
(3)制备携带GmbHLH47启动子的转基因植物:利用将步骤(2)得到的农杆菌侵染植物,得到携带GmbHLH47启动子的植物。
进一步地限定,步骤(1)所述重组载体的构建方法具体如下:利用限制性内切酶分别酶切载体pMD18T-GmbHLH47启动子和pBI121-GUS质粒,得到GmbHLH47启动子的序列片段与pBI121-GUS质粒的酶切产物,然后将GmbHLH47启动子的序列片段与pBI121-GUS质粒的酶切产物进行连接,获得pBI121-GmbHLH47pro::GUS。
进一步地限定,上述连接反应的体系是:5μL的pBI121-GUS质粒酶切产物、3μL的GmbHLH47启动子的序列片段、1μL的10×T4 DNA连接缓冲液和1μL的T4 DNA连接酶,反应温度为16℃,反应时间为12h。
老年急性髓细胞白血病是一种好发于老年,不能耐受造血干细胞移植和大剂量化疗的病人。细胞免疫治疗是其中的一种治疗方法,具有不良反应小,患者可以耐受的特点。树突状细胞是目前递呈抗原能力最强的细胞,具有诱导初级免疫应答的能力。细胞因子诱导的杀伤细胞可以直接杀伤和熔接肿瘤细胞。从老年急性髓细胞白血病病人中成功提取外周血单个核细胞进行培养,成功培养自体树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞。联合化疗进行治疗,以单一化疗为对照组,观察到治疗组疗效高于对照组。
本课题选择符合WHO分类的急性髓细胞白血病诊断标准,年龄大于60岁的初次诊断的老年急性髓细胞白血病病人,对所有的病人均进行血常规、骨髓相、染色体、心电、胸片、肝肾功能和凝血相的检测。所有病人本人或者委托人均都签署知情同意书。经哈尔滨医科大学附属第四医院伦理委员会批准后进行。选用德国费森尤斯血细胞分离机进行分离含有白血病原始细胞的外周血单个核细胞(PBMNC)2.0×109个。本课题将采集的血细胞平均分成2份,在符合GMP认证标准的实验室进行培养DC和CIK细胞,一份用于培养DC细胞。分别采集培养前和培养8天的DC细胞,将FITC标记的鼠抗人CD1a、CD80、CD40、CD83、CD86单克隆抗体及PE标记的鼠抗人HLA-DR单克隆抗体,应用流式细胞仪进行检测。检测到DC细胞表面标记较培养前有显著性上升,提示原始细胞的外周血单个核细胞可
雷锋团队是由哈尔滨师范大学14级政治与行政学院的关明贺同学于2015年9月1日建立的学生自主创立的创业团队。在黑龙江福成科技有限公司的赞助下,旨在为江北的大学生服务,让大学生过上更好的大学生活。自创立以来,雷锋团队本着为同学服务的宗旨,解决大学生生活问题为核心,为大学生提供广大的创业机会。创立后不久已成为哈尔滨江北十余所大学院校人数最多、最有号召力和影响力的学生团队组织。
2,4-二枯基酚是重要的精细化工原料,可用于紫外线吸收剂(特别适用于聚碳酸酯制品)、表面活性剂、农用乳化剂、杀菌剂等精细化学品的生产。随着上述产品的不断发展,特别是聚碳酸酯制品产量不断扩大,2,4-二枯基酚的需求量不断增加。目前,世界市场的需求量大约为10000吨/年,国内需求量在每年1000吨左右。2,4-二枯基酚的生产一般是在酸性催化剂存在下,由苯酚和α-甲基苯乙烯的烷基化反应得到的。该产品国外在80年代末开始工业化生产,国内的研究工作从90年代末开始,但由于反应选择性差、分离提纯困难,污染问题难以解决等因素,国内至今没有解决2,4-二枯基酚的生产技术,生产所需2,4-二枯基酚全部依赖进口。本项目针对上述在2,4-二枯基酚合成中存在的问题,从选择合适催化剂、提高苯酚烷基化反应的选择性,减少提纯工艺的难度入手,同时采用高真空精馏与不同溶剂二次重结晶的方法提纯2,4-二枯基酚,保证2,4-二枯基酚的纯度达到99%以上。采用独创的原位中和的方法除去酸性催化剂,合成中完全没有废水产生,解决环境污染问题。选择催化剂使α-甲基苯乙烯二聚体可以解聚,重新参加烷基化反应,大大提高了α-甲基苯乙烯的利用率,提高产品的经济效益。
技术转让、合同、入股均可,具体资金双方协商,希望尽快落地实现产业化。