马流产沙门氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒及其应用
成果类型:: 发明专利
发布时间: 2022-11-08 20:24:20
本发明公开了一种马流产沙门氏菌C-ELISA抗体检测试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有由保藏编号为CGMCC No. 21990的杂交瘤细胞株分泌产生的抗马流产沙门氏菌FljB蛋白的单克隆抗体。本发明建立的马流产沙门氏菌C-ELISA抗体检测方法其敏感性比现行凝集试验TAT高32倍。C-ELISA方法的特异性更好:与常见的马传贫、马流感、马鼻肺炎、马动脉炎等病毒病以及马腺疫、鼠伤寒沙门氏菌感染、都柏林沙门氏菌感染等细菌病的血清抗体均不反应,仅与马流产沙门氏菌特异性抗体反应。本发明为马流产沙门氏菌抗体的检测提供了一种新的技术手段,适合实验室对马流产沙门氏菌抗体的快速高通量检测,可用于疾病诊断、动物免疫状态评估和监测。
本发明是国际首个马流产沙门氏菌抗体C-ELISA试剂盒,主要具有以下特点和优势:① 特异性强:该试剂盒仅可以检测出马流产沙门氏菌特异性阳性血清,对于其他沙门氏菌和常见马传染病阳性血清检测无交叉反应。② 敏感性高:高于试管凝集试验的检测敏感性。③ 重复性:该试剂盒不同批次的组内、组间试验重复非常好。④ 高通量:相对于试管凝集试验,可以实现样品的高通量检测。⑤ 快速:整个实验仅需要30分钟。在反应时间上比传统方法缩短40倍以上,使检测效率大大提高⑥ 样品操作简便:无需稀释,大量样品检测效率更高。⑦ 不受血清种属来源的限制,驴血清和马血清均可以检测。
马流产沙门氏菌病(Equine abortus Salmonellosis),又称为马副伤寒(Equi parathphoid),是由马流产沙门氏菌(Salmonella abortus equi, ***.equi)引起的以马属动物流产为特征的传染病。应当注意的是,在极个别情况下,可能检出沙门氏菌的其他血清型,比如鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,***)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,S. enteritidis)、都柏林沙门氏菌(Salmonella dublin,***)等,应根据细菌抗原构造予以鉴别。该病易感染初产母畜,多数母畜在发生流产前,一般无明显临床症状,突发流产,绝大多数为死胎,有少数存活的胎儿,在出生几天后,也会发生死亡。妊娠母马流产时,病菌随流产胎儿、胎衣、羊水及阴道分泌物排出体外, 病公马 (驴) 能随精液排菌。
近年来,该病在我国华东、华北和西北等地区暴发流行,引起马、驴的流产(流产率为20-100%),幼驹关节炎、腹泻等。该病的发生直接影响了我国马、驴的存栏量、造成严重的经济损失。目前该病还有蔓延的趋势,对我国马业持续发展产生潜在的威胁和巨大的影响,严重阻碍了我国马业的发展。但该病在国内、外的研究较少,缺乏特异性的检测技术,我国《马流产沙门氏菌病诊断技术(NY/T 570-2002)》行业标准(行标)中提及该病的血清学检测方法为试管凝集试验(TAT),该方法可以检测马流产沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌等多种沙门氏菌的抗体,因此特异性不强;由于试验结果依赖于肉眼观察细菌与抗体的凝集程度,因此敏感性不高、需要有经验的人员操作;而且操作繁琐、耗时费力;采用试管进行操作、样品又需要多个稀释度,无法满足大规模样品检测的需要。
本成果可用于不同马属动物中马流产特异性抗体的检测。该发明填补了马流产沙门氏菌无特异性血清学检测的空白,可用于疾病的早期诊断、免疫状态评估、疾病净化等。在国内、国际市场均属空白,具有广阔应用前景。
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(简称“哈兽研”)马传染病和慢病毒病研究创新团队(简称“马病团队”)是我国唯一的一支国家级马病研究团队,70年来专注马传染病的研究,是国家认定的国家马传染性贫血参考实验室、国家马鼻疽参考实验室,世界动物卫生组织 OIE认定的马传染性贫血参考实验室。在历史上,团队早期领导人兽医免疫学家中国工程院沈荣显院士研制成功了马传染性贫血病毒弱毒疫苗,成功控制了该病在国内的流行,并获得国家技术发明一等奖。目前团队由王晓钧研究员带领,有高级职称固定研究人员10人,博士后、博士、硕士生20余人。在马传贫、马流感等研究领域处于国际先进水平,研发了马流感等5种马(驴)用疫苗、20多种常见重要马传染病诊断试剂盒。长期开展马病流行病学监测、病原学、免疫学和防控技术研究。
本成果前期由哈兽研马病团队投入资金50万元,完成了实验室研究。正在申报新兽药注册。该产品的成功研制和应用,将解决我国乃至世界该领域缺乏快速准确诊断方法的难题,为疾病的早期诊断、免疫状态评估及该病的种群净化提供关键技术方案。
产品投产后,为市场唯一产品,国内国际市场均有巨大潜力,经济效益前景显著。
本成果对高效绿色养殖、科学防治疫病具有的重要意义,适用于马、驴血清的检测。临床上通过进行血清学调查可以评估马群、驴集约化养殖场的患病情况,以便及时采取防治措施。
转化方式以技术合作方式,可探讨技术转让、市场合作。
根据用户的需求可提供多种形式的技术合作服务。一方面,本成果可提供检测技术服务的方式,对送检样品进行检测,并出具检测报告,提供检测数据和分析报告。另一方面,对于大型集约化养殖场,本成果可采用综合性技术服务的方式,主要分为三大板块的内容,第一,包括马流产沙门氏菌病在内的等10余种马属动物疫病的健康评估;第二,特别针对流产的致病菌进行疫病病原的确诊;第三,提供相应的防治方案。