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本发明涉及化合物制备领域，具体涉及一种使用超临界流体色谱制备放线菌素D和X2方法，包括如下步骤：将含放线菌素D和/或X2的粗提物进行超临界流体色谱法分离,得到放线菌素D和/或X2；所述超临界流体色谱法分离的流动相由流动相A和B组成，流动相A为超临界CO2，流动相B为甲醇、乙醇或含体积百分含量为0.1％三氟乙酸的乙醇；等度洗脱时，所述流动相A与流动相B的体积比例为80:20或75:25；梯度洗脱时，0～40min流动相由超临界CO2：乙醇的体积比由98:2变为60:40。本发明提供一种基于超临界色谱分离技术的放线菌素D和/或X2的制备方法，对放线菌素D和X2实现了高效绿色的分离。

超临界流体色谱近些年在突破了检测器灵敏度和设备稳定性的技术瓶颈后，由于其流动相超临界CO2流体的高扩散性和低粘度优点，因此成为继HPLC之后强大的分离手段，结合夹带剂和添加剂对保留行为的改变，拥有反相色谱的易用性和正相色谱分离能力，特别是目前的结构类似物分离和规模化制备过程中具有无可比拟的优势。鉴于放线菌素D在临床抗癌药物重要性和放线菌素X2作为候选药物巨大的潜力，提供一种基于超临界色谱分离技术的放线菌素D和/或X2的制备方法，对放线菌素D和X2实现了高效绿色的分离，旨在提供一种用于放线菌素D和X2工业上规模化制备的新方法。

本发明首先对采自中国广东省深圳市南澳岛的海水样品中分离到的一株链霉菌Streptomyces ***-5进行菌种鉴定，并进行了保藏。然后利用2216E液体培养基配制种子液，采用大米固体培养基进行大批量发酵。发酵物的有机溶剂粗提物先用正相硅胶柱进行富集和除杂，最后采用超临界色谱对富含放线菌D和X2的组分进行精制，得到高纯度放线菌素D和X2，并用核磁共振对其进行表征。最终建立一种基于超临界流体色谱技术的放线菌素D和X2的制备方法，为工业上放线菌素D和X2规模化制备提供可行有效的新方案。

深圳大学秉承“自立、自律、自强”的校训，紧随特区，锐意改革、快速发展，在较短的时间内形成了从学士、硕士到博士的完整人才培养体系以及多层次的科学研究和社会服务体系，形成了“特区大学、窗口大学、实验大学”的办学特色，培养了20多万各类创新创业人才，95%以上扎根粤港澳大湾区，为特区发展和国家现代化建设做出了重要贡献。特别是进入新时代以来，学校实施高水平大学建设发展战略，成为内地进步最快的大学之一，综合实力得到全面快速提升，实现了从本科教学型大学向教学科研并重型大学的转型，创新创业人才培养、人事管理体制等领域的改革走在全国前列。目前，学校已经成为一所特色鲜明、实力雄厚、在国内外具有良好声誉和重要影响力的高水平综合性大学。

近年来对放线菌素类物质深入研究发现，放线菌素X2也具有广谱的抗肿瘤活性，甚至活性更强。 目前对放线菌素D和X₂的制备方式主要有化学合成法、微生物发酵法、生物合成法。由于目前生物合成法仅仅停留在实验室阶段，而化学合成法产品工艺复杂，合成步骤长，产率不高，原料价格成本高、毒性大、安全性差，所用的有机试剂环境污染严重，废弃物难处理本。发明首次利用超临界色谱技术实现了对含放线菌素D和/或X2的粗提物中放线菌素D和X2高效绿色的分离，制备效率高、安全绿色、易于规模化工业应用，且流动相采用的二氧化碳具有性质稳定、无毒、不易燃爆和价格低廉的优点。

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