一种抗呋喃唑酮代谢物单克隆抗体及其应用
成果类型:: 新技术
发布时间: 2022-11-06 20:32:29
本发明涉及一种抗呋喃唑酮代谢物单克隆抗体、产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以及该抗体在检测呋喃唑酮代谢物上的应用,属于免疫学技术领域和兽药残留分析技术领域。本发明所要解决的技术问题是克服现有技术之缺陷提供一种抗呋喃唑酮代谢物单克隆抗体,所述单克隆抗体对呋喃唑酮代谢物有特异性,所述抗单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO:C2016140的杂交瘤细胞株AOZ-4G3产生。进一步的,本发明将该单克隆抗体应用于检测呋喃唑酮代谢物。
一种抗呋喃唑酮代谢物单克隆抗体,该单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO:C2016140的杂交瘤细胞株产生。该杂交瘤细胞株被命名为杂交瘤细胞株AOZ-4G3,于2016年7月31日送交中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏,保藏号为CCTCC NO:C2016140。上述抗呋喃唑酮代谢物单克隆抗体效价为1:1024000,亚型为IgG1,亲和力常数Ka=1.6×109L/mol,对呋喃唑酮代谢物抑制率IC50为1.7μg/L,与呋喃唑酮代谢物的交叉反应率为100.00%,与其它几种相似物(呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因代谢物、呋喃它酮代谢物、呋喃西林代谢物)无交叉反应;上述呋喃唑酮代谢物单克隆抗体在用于配制检测生物样品中的呋喃唑酮代谢物的非诊断目的检测产品中的应用。上述应用,所述非诊断目的检测产品为酶联免疫试剂盒或胶体金层析试纸条。
呋喃唑酮(Furazolidone,FZD),又名痢特灵,是一种硝基呋喃类药物,对常见的革兰氏阴性菌和阳性菌有抑制作用,作用于微生物酶系统,抑制乙酰辅酶A,干扰微生物糖代谢,从而起到抑菌作用。广泛用于水产和禽类,用以治疗菌痢、肠炎、球虫等,以及养殖鱼的疥疮、赤鳍病、溃疡等。因其杀菌能力强,抗菌谱广,不易产生耐药性,口服吸收迅速,与其他抗生素无交叉耐药性等优点,曾广泛应用于临床。呋喃唑酮具有很强的副作用,而且在动物体内很快就代谢为3-氨基-2-唑烷酮(AOZ),AOZ在胃酸条件下直接代谢成为具有强烈致突变性和致癌性的β-羟乙基肼,对人体健康与生态平衡具有潜在威胁。目前,欧盟、美国、日本、中国等规定禁止在食用动物中使用硝基呋喃类抗生素,我国农业部文件农牧发[2002]1号文件规定食品性动物中呋喃唑酮的检出限为不得检出。所述的单克隆抗体可用于制备检测呋喃唑酮代谢物的酶联免疫试剂盒和胶体金试层析试纸条,以达到快速且灵敏地检测动物组织、尿液及牛奶中的呋喃唑酮药物代谢物的目的。
河北省科学院成立于1978年,是河北省政府直属的综合性自然科学研究与技术开发机构,全院占地13.8万m2,建筑面积8.3万m2,总资产1.76亿元,固定资产1.29亿元。院机关设有8个处室,下辖地理科学研究所、应用数学研究所、生物研究所、能源研究所、自动化研究所、激光研究所、微生物研究所和机电一体化中试基地(机电研究所)等8个研究开发单位。全院共有职工700余人,专业技术人员530余人,高级职称人员170余人,博士31人,硕士98人,博士生导师14人,硕士生导师18人,享受国务院特殊津贴专家2人,享受河北省政府特殊津贴专家10人,河北省“百人计划”(省政府特聘专家)2人,入选河北省“三三三人才工程”第二层次人选15人、第三层次人选41人。 近年来,省科学院先后承担了“863”、“973”等国家、省部级重点项目和基金课题430余项,取得各类科研成果 1480余项,获省部级以上奖励697项,授权发明专利100项、软件著作权85项。
目前有关呋喃唑酮残留的检测技术主要有高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)、液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)及免疫分析技术,前三种方法灵敏、准确,但操作繁琐,对实验设备和技术要求较高,不适合大批量样品的快速检测。免疫分析方法包括酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体金免疫层析法(GICA),具有灵敏度高、特异性好、成本低、操作方便等特点,适于大批量样品筛选。因此,抗呋喃唑酮代谢物单克隆抗体的制备对于动物性食品免疫快速检测方法的建立以及保障人类健康具有重要意义。
本发明涉及一种抗呋喃唑酮代谢物单克隆抗体及其应用,属于免疫学技术领域和兽药残留分析技术领域。所述抗单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO:C2016140的杂交瘤细胞株分泌产生,该抗体效价为1:1024000,亚型为IgG1,亲和力常数Ka=1.6×109L/mol,对呋喃唑酮代谢物抑制率IC50为1.7μg/L,对其它呋喃唑酮代谢物相似物无交叉反应。所述的单克隆抗体可用于制备检测呋喃唑酮代谢物的酶联免疫试剂盒和胶体金试层析试纸条,以达到快速且灵敏地检测动物组织、尿液及牛奶中的呋喃唑酮药物代谢物的目的。