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本发明公开了一种应用固相萃取 超临界流体色谱 质谱法检测乳中极性脂的方法,属于食品检测领域,含有极性脂的总脂质物的提取步骤，极性脂的富集和净化得到极性脂富集物的步骤以及对极性脂富集物复溶后进行超临界流体色谱-质谱检测分析的步骤。本检测方法可以实现胆固醇、磷脂和鞘脂的统一测定，优化固相萃取条件使得胆固醇和神经鞘磷脂能够保留在极性脂洗脱液中，并且实现快速定性定量检测。

本发明的目的是提供一种应用固相萃取-超临界流体色谱-质谱法检测乳中极性脂的方法的应用，用于乳液体原料、乳制品的成分检测。进一步地，所述含有极性脂的总脂质物的提取步骤包括：向乳液体原料中加入有机溶剂A后震荡混匀，再加入有机溶剂B后震荡混匀，然后超声，冰水浴超声5～20分钟，再加入溶液C震荡混匀促进分层，得到混合物Ⅰ；将所得的混合物Ⅰ经离心机离心，移取下层有机溶液，并向上层溶液中加入有机溶剂D进行二次提取净化，再经离心机离心后，移取下层有机溶液，将两次提取的有机溶液合并后用溶液C洗涤，震荡混匀再经离心机离心后，弃去上层溶液，下层溶液用氮气吹干，得到含有极性脂的总脂质提取物；

乳脂以脂肪球形式存在于乳中，其核心甘油三酯被外部由磷脂、胆固醇等极性脂组成的膜包围，从而保持整个乳液体系稳定。胆固醇是细胞膜的重要成分，乳中磷脂与婴儿大脑和肠道免疫系统发育、胃肠道感染保护以及老年人记忆力改善相关，磷脂酰胆碱(PC)和神经鞘磷脂(SM)是重要的极性脂，是器官和细胞膜快速生长所需的结构成分。乳脂中有约98％为甘油三酯，极性脂含量极少。因此，在一些检测过程中，高含量的甘油三酯对极性脂的检测造成干扰。因此，往往需要对极性脂进行富集和净化。乳中极性脂组成复杂、性质差异大，较难分析。

固相萃取(SPE)是样品制备的有效方法之一，其基本原理类似于液-液萃取，该方法能够从样品溶液中吸附并富集和纯化固体吸附剂填料上的分析物。针对极性脂的富集和净化，目前已有的专利和文献针对磷脂进行富集，然而现有方法大多存在神经鞘磷脂和胆固醇损失的问题。胆固醇相比于磷脂，与甘油三酯的极性更接近，使得分离纯化难度提高。另外，已有专利CN106153763A 通过液相对极性脂进行分离纯化，但该方法存在操作繁复，易造成胆固醇和神经鞘磷脂的损失，且单次样本乳脂消耗量大等问题。

相关技术中，鲜有报道能够同时定性定量检测乳中胆固醇、磷脂和鞘脂的组成，这往往需要多种不同的检测方法，进而导致了数据无法统一并且增加了乳脂消耗量，使得一些珍稀乳品的检测受到了限制。另外，相关技术中的极性脂的色谱检测方法时间普遍较长，使得极性脂分子种类难以实现准确定性。

本发明在食品检测领域有着广泛的应用前景。

发明人：王兴国 韦伟 江晨瑜 金青哲

江南大学是教育部直属、国家“211工程”重点建设高校和“双一流”建设高校。学校具有悠久的办学历史、厚重的文化积淀，源起1902年创建的三江师范学堂，历经国立中央大学、南京大学等发展时期；1958年南京工学院食品工业系整建制东迁无锡独立建校，成立无锡轻工业学院；1962年无锡纺织工学院并入无锡轻工业学院；1995年更名为无锡轻工大学；2001年无锡轻工大学、江南学院、无锡教育学院合并组建江南大学；2003年东华大学无锡校区并入江南大学。

本发明的检测方法包括：含有极性脂的总脂质物的提取步骤，极性脂的富集和净化得到极性脂富集物的步骤以及对极性脂富集物复溶后进行超临界流体色谱-质谱检测分析的步骤，实现了极性脂极低含量(小于5％)样品的富集，操作简便、样品消耗量少、成本较低、检测迅速、定性定量能力较强、实用性强，结果稳定可靠，适合统一检测乳中极性范围分布较广的极性脂。可在10分钟内检测14大类极性脂，适用于各种乳液、乳制品、乳粉及其他生物样本中的极性脂的快速分析。

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