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本发明公开了青虾Cathepsin D基因及其dsRNA的应用,属于生物技术领域。首先获得青虾Cathepsin D基因,其核苷酸全长序列为SEQ ID NO:1,氨基酸序列为SEQ ID NO:2。而后利用RNA干扰等技术获得序列为SEQ ID NO:3基因片段,并以此基因片段为模板合成dsRNA1。将dsRNA1注入雌性青虾围心腔后,在第10、20和30天,dsRNA1组青虾的性腺发育指数分别为1.45%,1.64%和1.79%,均显著低于对照组和dsRNA2组。由此可见,dsRNA1可以有效减缓雌性青虾卵巢发育速度。

本发明提供的一种青虾Cathepsin D干扰基因片段获取方法如下：对青虾Cathepsin D氨基酸序列分析后，选择Cathepsin D特异性区域，设计了两对干扰引物，一是上游引物SEQ ID NO：4和下游引物SEQ ID NO：5，二是上游引物SEQ ID NO：6和下游引物SEQID NO：7，然后以青虾总cDNA为模板进行PCR扩增得到DNA片段SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：8。

青虾，学名日本沼虾(Macrobrachium nipponense)，俗称为河虾，是中国重要的淡水养殖虾类之一。雌性青虾具有“性快熟”的特点，在进入繁殖季节后，虾苗放养45天左右可以达到性成熟，当年生的雌虾可繁殖多代。特别是在夏季水温较高时期，雌虾一个卵巢成熟周期只需要15天时间。这一特点是多年来一直困扰青虾产业的重要问题。卵巢快速成熟导致青虾繁殖过快，引起多代同堂，继而引发养殖密度过高、缺氧风险显著提高、饲料消耗增大等问题，严重影响了养殖的经济效益，更给家系选育等科研工作造成难题。因此，找到控制青虾卵巢快熟的方法，对于青虾产业健康高效的发展意义重大。

组织蛋白酶D(Cathepsin D)广泛存在于各种生物体中，属于酸性溶酶体内切蛋白酶，能够水解胞内蛋白和多肽，维持细胞稳态。在人和哺乳动物中，组织蛋白酶D参与激活酶原和生长因子、大脑抗原呈递、表皮分化及细胞凋亡等多种机体生理活动。

RNAi(RNA interference,RNAi)技术是利用双链RNA在Dicer酶作用下形成众多小的RNA片段，最终引起靶向mRNA发生降解，导致细胞或个体不能合成相应的氨基酸，引起个体功能表现缺失，达到干扰敲除的目的。已有研究证实，对青虾卵黄蛋白原基因进行RNAi，可有效抑制青虾卵巢发育(Bai et al,2015)。证明RNAi技术在解决青虾“性快熟”问题中具有很好的应用前景。

发明人：乔慧 程丹 傅洪拓 张文宜 蒋速飞 熊贻伟 金舒博 龚永生中国水产科学研究院淡水渔业研究中心系农业农村部（原农业部）所属综合性淡水渔业研究机构。前身为“太湖水产增殖科学实验基地”、“亚太地区综合养鱼研究和培训中心”，1978年建立于无锡。因单位撤并及隶属关系，先后有“国家水产总局长江水产研究所”、“中国水产科学研究院长江水产研究所”等多个称谓，1984年改为现称。“八五”以来一直位列“全国农业科研综合实力百强研究所”。2002年11月，被国家科技部、财政部和中编办确定为非营利性科研机构，进入国家科技创新体系。

1、在注射dsRNA1后第4天与第7天卵巢中的Cathepsin D基因沉默效率分别为98.80％、99.48％，有效的抑制了青虾Cathepsin D基因的表达。

2、注射dsRNA1可以有效降低青虾Cathepsin D基因mRNA的表达，抑制青虾卵巢发育速度。青虾在第10天，dsRNA1组性腺发育指数为1.45％，显著低于对照组(2.37％)，第20天，dsRNA1组性腺发育指数为1.64％，显著低于对照组(3.19％)，即使到了第30天，dsRNA1组性腺发育指数也仅为1.79％，显著低于对照组(4.57％)和dsRNA2组(3.29％)。

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