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本发明公开了一种白蛋白/角蛋白双表达小鼠胚胎干细胞系及其建立方法，本发明的小鼠胚胎干细胞系由白蛋白/角蛋白双表达的小鼠胚胎干细胞传代培养建立，所述小鼠胚胎干细胞整合有红色荧光/绿色荧光蛋白双报告基因，所述报告基因由组织特异性启动子白蛋白ALB或角蛋白CK19调控。与基因敲入的方法相比，本发明利用转染组织特异启动子操纵报告基因的方法更简便、更快捷、具有更大的实用性。利用本发明的白蛋白/角蛋白双表达小鼠胚胎干细胞分化，可以明确地分选得到发育阶段均一的肝祖细胞，对接下来的肝祖细胞分化机制研究和细胞移植及治疗带来极大的有益效果。

选用ALB启动子和CK19启动子分别调控不同的报告基因，建立了两株基因修饰胚胎干细胞系：E14-ALB-mRFP/CK19-EGFP和E14-ALB-EGFP/CK19-hCD25-IRES-tdTOMATO，这两株胚胎干细胞在体外诱导分化时，可以分化为带有绿色/红色荧光标志的CK19/ALB双阳性的肝祖细胞，从而标记肝祖细胞的出现。与基因敲入的方法相比，本发明利用转染组织特异启动子操纵报告基因的方法更简便、更快捷、具有更大的实用性。利用本发明的白蛋白/角蛋白双表达小鼠胚胎干细胞分化，可以明确地分选得到发育阶段均一的肝祖细胞，对接下来的肝祖细胞分化机制研究和细胞移植及治疗带来极大的有益效果。

肝祖细胞是一种在胚胎肝发育中处于特异时间点的带有肝细胞和胆管表皮细胞双潜能的细胞类型，在特定的条件下，既可以分化为肝实质细胞又可以分化为胆管细胞。在以往有关于ES细胞分化为肝祖细胞的报道中，AFP被作为肝祖细胞的一个标志性基因与EGFP相连，通过检测AFP的表达来证明肝祖细胞的出现，但是实际上，AFP并不仅仅表达在肝祖细胞中，它同时在脏壁内胚层也有高表达，而脏壁内胚层最终分化为胚外组织并不参与肝脏的分化和发育，所以AFP的表达不能准确地标定肝祖细胞的存在。目前为止，仍然没有公认的识别肝祖细胞的表面标志蛋白，所以这给ES细胞分化得来的肝祖细胞追踪和分选带来一定的困难。

该技术公开了一种白蛋白/角蛋白双表达小鼠胚胎干细胞系及其建立方法，该技术的小鼠胚胎干细胞系由白蛋白/角蛋白双表达的小鼠胚胎干细胞传代培养建立，所述小鼠胚胎干细胞整合有红色荧光/绿色荧光蛋白双报告基因，所述报告基因由组织特异性启动子白蛋白ALB或角蛋白CK19调控。

项目所在单位致力于生命科学前沿基础研究与应用基础研究，依托多学科重点实验室，开展基因调控、RNA与表观遗传学，蛋白质科学，细胞信号转导，细胞与干细胞生物学，癌症和其他重大疾病机理等领域的研究。

利用转染组织特异启动子操纵报告基因的方法更简便、更快捷、具有更大的实用性。利用该技术的白蛋白/角蛋白双表达小鼠胚胎干细胞分化，可以明确地分选得到发育阶段均一的肝祖细胞，对接下来的肝祖细胞分化机制研究和细胞移植及治疗带来极大的有益效果。

转染、许可、合作开发