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本发明公开了一种基于基因打靶家蚕制备蜘蛛家蚕复合丝纤维的方法,具体为基于基因打靶家蚕制备蜘蛛大壶状腺丝蛋白与家蚕丝蛋白复合丝纤维的方法。将pUC target Heavy g和表达Cas12a核酸酶的质粒piggyCPF1注射至家蚕初产卵中,通过荧光初筛、分子生物学鉴定和继代筛选,获得蜘蛛大壶状腺丝蛋白基因序列表达盒替代家蚕丝素重链基因表达盒的基因打靶家蚕。该基因打靶家蚕常规饲养,将熟蚕移至簇具,营茧,采茧,经过缫丝获含金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白的复合蚕丝。利用本发明可获取含有金丝织网蜘蛛大壶状腺丝蛋白的蚕丝,用于制作各种纺织丝绸制品,满足制备各种生物材料对丝蛋白的多样性的需求,也可以用获得的基因打靶家蚕通过常规杂交育种的手段,选育新家蚕品种。

本发明的目的是提供了一种基于基因打靶家蚕制备蜘蛛家蚕复合丝纤维的方法，具体为一种基于基因打靶家蚕制备蜘蛛大壶状腺丝蛋白与家蚕丝蛋白复合丝纤维的方法。 为达到上述目的，本发明采用的技术方案是： 一种基于基因打靶家蚕制备蜘蛛家蚕复合丝纤维的方法，包括下列步骤： (1)构建基因打靶载体pUC-target-Heavy-g； (2)将基因打靶载体pUC-target-Heavy-g与表达Cas12a核酸酶的质粒混合，然后引入家蚕初产卵内，再孵化；优选的，表达Cas12a核酸酶的质粒为表达Cas12a核酸酶的质粒piggyCPF1； (3)家蚕初产卵孵化后，饲养至化蛾，雌雄交配，获蛾圈蚕卵； (4)利用特异性引物扩增蛾圈蚕卵的亲本蛾DNA，筛选基因打靶蚕蛾产的卵； (5)将亲本为基因打靶蚕蛾交配所产的卵催青后，正常饲养至化蛾，同蛾区交配产卵；然后利用特异性引物扩增蛾的DNA，然后对扩增产物测序验证，选择䧳雄亲本均为纯系的基因打靶蚕蛾交配所产的卵继代； (6)步骤(5)获得的卵孵化后，常规饲养至上蔟，进而获得蜘蛛家蚕复合丝纤维。

发明人： 贡成良 王崇龙 胡小龙 朱敏 周文林 李继杰 童新宇 邱群婻 冯永杰 苏州大学坐落于素有“人间天堂”之称的历史文化名城苏州，是国家“211工程”“2011计划”首批入列高校，是教育部与江苏省人民政府共建“双一流”建设高校、国家航天局共建高校，是江苏省属重点综合性大学。苏州大学前身是Soochow University（东吴大学，1900年创办），开现代高等教育之先河，融中西文化之菁华，是中国最早以现代大学学科体系举办的大学。在中国高等教育史上，东吴大学是最早开展研究生教育并授予硕士学位、最先开展法学（英美法）专业教育，也是第一家创办学报的大学。1952年中国大陆院系调整，由东吴大学之文理学院、苏南文化教育学院、江南大学之数理系合并组建苏南师范学院，同年更名为江苏师范学院。1982年，学校更名苏州大学（Soochow University）。

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