科创中国

生物与新医药技术

本发明检测人GPR1基因表达量的多重荧光探针定量方法及其应用，属于生物医学技术领域。本方法包括：设计GPR1基因的上下游引物和探针；以人GAPDH基因和人18s基因作为检测的双内参基因，设计两组上下游引物和探针；在同一反应体系中，将RT‑PCR缓冲液、反转录酶、Taq酶、待测样本总RNA、和上述上下游引物和探针混合，配置获得反应体系；进行反转录，进行实时荧光定量PCR反应同时进行荧光信号采集；判定GPR1基因在待测样本中是否表达，并计算GPR1的基因表达量。本发明检测方法具有简便快速、特异性高、高通量、无污染等特点，适用于人细胞、组织中的GPR1基因的表达检测。

.一种检测人GPR1基因表达量的多重荧光探针定量方法，其特征在于包括以下步骤： (1)以人GPR1基因为检测的目标基因，针对GPR1基因部分片段设计上游引物GPR1-F、下游引物GPR1-R作为特异性扩增引物，和GPR1-P作为探针； (2)以人GAPDH基因为检测的内参基因，针对GAPDH基因部分片段设计上游引物GAPDH-F、下游引物GAPDH-R作为特异性扩增引物，和GAPDH-P作为探针； (3)以人18s基因为检测的第二个内参基因，针对18s基因部分片段设计上游引物18s-F、下游引物18s-R作为特异性扩增引物，和18s-P作为探针； (4)在同一反应体系中，将RT-PCR缓冲液、反转录酶、Taq酶、待测样本总RNA、上述步骤(1)设计得到的上游引物GPR1-F、下游引物GPR1-R和GPR1-P，上述步骤(2)设计得到的上游引物GAPDH-F、下游引物GAPDH-R和GAPDH-P，上述步骤(3)得到的上游引物18s-F、下游引物18s-R和18s-P混合均匀，配置获得反应体系；

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