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基于PMA染色结合荧光定量PCR法快速检测黄瓜棒孢叶斑病菌的方法及应用

发布时间: 2023-10-18

来源: 科技服务团

基本信息

合作方式： 技术转让
成果类型： 发明专利
行业领域：
农、林、牧、渔业,农业
成果介绍
本发明公开了检测或辅助检测多主棒孢菌的方法，所述方法包括以下步骤:A1)、使用叠氮溴化丙锭处理待测样品;。A2)、提取 A1)处理完毕的样品的基因组DNA;A3)、以A2)所得的基因组DNA作为模板，以SEQID ***所示的单链DNA和SEQ ID ***所示的单链DNA作为引物进行实时荧光定量PCR，根据扩增曲线确定所述待测样品是否感染多主棒孢菌和/或确定所述待测样品中多主棒孢菌的含量和/或所述待测样品是否为多主棒孢菌。本发明所建立的黄瓜棒孢叶斑病菌PMA-qPCR定量检测方法，具备快速、高效及准确定量的优点，为病害的监测预警提供了技术支撑，对于研究掌握病原菌的侵染源、传播途径和流行规律，制定综合防控技术措施，严防病害入侵具有重要意义。
成果亮点
基于黄瓜棒孢叶斑病菌的琥珀酸脱氢酶b亚基序列设计并合成的一对特异性引物ccf3/ccr3，通过优化pma的质量浓度和曝光时间，确定区分多主棒孢菌死活菌的pma预处理最优反应条件，再以活菌dna为模板进行qpcr的特异性扩增。设置不同比例死活菌混合体系，验证pmaqpcr反应的可靠性。结果表明：当多主棒孢菌浓度为1×107孢子·ml1、pma浓度为80μmol·l1、曝光时间为10min时，能完全抑制死菌的扩增。当活菌比例为0％～100％时，pmaqpcr测得的活菌数与理论活菌数值和菌落计数均在同一个数量级，线性回归方程y＝***+***，r2＝***，此方法检测灵敏度下限为100个孢子/ml，标准曲线的重复性和稳定性良好。
团队介绍
谢学文，有害生物与环境安全博士，副研究员，2009年至今，中国农业科学院蔬菜花卉研究所工作，主要从事蔬菜主要病害综合防治、土壤微生物群落多样性及生防资源综合利用研究。 围绕园艺作物病害开展相关研究，从病原菌分类、分子鉴定，遗传多样性分析等角度入手，具体开展土传病害生物防治及土壤微生物群落多样性研究，同时开展园艺作物病害防控用药剂的剂型及应用技术研究，致力于解决园艺作物病害综合控制技术难题。该发明团队其他成员为李宝聚、陈利达、柴阿丽、李磊、石延霞、范腾飞。
成果资料
产业化落地方案
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成果综合评价报告

评价单位：“科创中国”国家农畜产品加工产业科技服务团 (中国农学会) 评价时间：2023-10-30

李立会

中国农业科学院作物科学研究所

研究员

综合评价

该项科技成果在病害检测领域具有显著潜力，尤其是在黄瓜棒孢叶斑病的监测和控制方面。通过结合化学处理和分子生物学技术，该方法克服了传统检测方法的一些限制，提供了一种更为灵敏和准确的工具。然而，应用该技术还需要进一步的市场推广和政策支持，以确保其广泛应用于农业实践。建议继续研究和发展，以适应更多病害的检测，以及提供培训和支持以促进技术的转化。
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