科创中国

生物与新医药技术

本发明涉及一种靶向髓系细胞基因编辑的CRISPR‑CAS系统及其构建方法。本方案利用分子生物学技术将CRISPR/Cas9系统中的Cas9核酸酶的启动子替换为髓系细胞特定识别的嵌合启动子，使得具有切割功能的Cas9核酸酶仅在髓系细胞中得以表达；并设计向导RNA构建靶向目的基因的CRISPR/Cas9质粒，随后通过慢病毒转染进行包装和生产。本方案可用于研究不同基因在髓系细胞调节肿瘤微环境中的作用。

权利要求 1.一种靶向髓系细胞基因编辑的CRISPR-CAS系统的构建方法，其特征在于，包括以下步骤： S1：合成嵌合启动子，所述嵌合启动子为改进的Cas9启动子，所述嵌合启动子仅在髓系细胞中启动； S2：将所述嵌合启动子插入目标载体； S3：合成向导RNA； S4：将所述向导RNA插入步骤S2中获得的含有所述嵌合启动子的所述目标载体中获得重组质粒； S5：转染所述重组质粒。 2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于：所述嵌合启动子的序列为SEQ ID ***或与SEQ ID ***有90％以上同源性的序列，或其互补序列。 3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在所述步骤S3中使用引物1和引物2合成所述向导RNA，所述引物1的序列为SEQ ID ***，所述引物2的序列为SEQ ID ***。

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