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物理

本申请提供的病毒核酸检测试剂的制备方法，ASFV扩增子与crRNA杂交后，Cas12a切割MB‑ssDNA‑ALP释放ALP，释放的ALP催化pNPP水解为pNP，从而产生比色信号，而pNP对CdZnSe量子点的内滤作用改变了荧光信号，采用这种双模式方法检测ASFV基因，吸收强度或荧光强度与ASFV基因浓度呈良好的线性关系，检出限为单拷贝。此外，该方法可对单拷贝ASFV基因进行肉眼检测，检测灵敏度高于qPCR。最后，该方法还能有效区分crRNA中的单碱基突变，对血清中的病毒DNA有较好的检测效果。因此，该方法具有良好的敏感性和特异性，在病毒感染诊断中具有很高的应用潜力。

1.一种病毒核酸检测试剂的制备方法，其特征在于，包括下述步骤： 合成Biotin-ssDNA-ALP； 根据所述Biotin-ssDNA-ALP合成MB-ssDNA-ALP； 反式切割所述MB-ssDNA-ALP的活性； 将经反式切割后的所述MB-ssDNA-ALP释放ALP； 所述ALP催化pNPP水解生成pNP； 在所述pNP中加入CdZnSe量子点。 2.如权利要求1所述的病毒核酸检测试剂的制备方法，其特征在于，在合成Biotin-ssDNA-ALP的步骤中，具体包括下述步骤： Biotin-ssDNA-N3与DBCO-ALP通过化学点击反应合Biotin-ssDNA-ALP。 3.如权利要求1或2所述的病毒核酸检测试剂的制备方法，其特征在于，在根据所述Biotin-ssDNA-ALP合成MB-ssDNA-ALP的步骤中，具体包括下述步骤： 将合成的Biotin-ssDNA-ALP与链霉亲和素修饰磁珠结合合成MB-ssDNA-ALP。

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