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本发明公开了一种构建适用于双光子荧光显微镜活体实时成像的缺血性脑卒中模型的方法及其应用。所述方法包括：将实验动物的头部目标区域的颅骨替换为透明材料并进行固定，作为观察区，固定后进行饲养，向饲养后实验动物体内注射孟加拉红，在观察区内选定目标造模缺血区域，使用光源照射目标造模缺血区域，获得所述缺血性脑卒中模型，所述实验动物的大脑皮层具有荧光标记。本发明在颅骨观察区内定点诱导孟加拉红激活产生活性氧，活性氧诱导血小板凝集形成血管栓塞，从而引发缺血性脑卒中，同时基于大脑皮层的荧光标记可进行双光子活体实时成像，从而可实现对缺血性脑卒中后梗死灶及对照组织发生的形态、数量及空间分布的变化进行长时程实时监测。

权利要求 1.一种构建适用于双光子荧光显微镜活体实时成像的缺血性脑卒中模型的方法，其特征在于，所述方法包括： 将实验动物的头部目标区域的颅骨替换为透明材料并进行固定，作为观察区，固定后进行饲养，向饲养后实验动物体内注射孟加拉红，在观察区内选定目标造模缺血区域，使用光源照射目标造模缺血区域，获得所述缺血性脑卒中模型； 所述实验动物的大脑皮层具有荧光标记。 2.根据权利要求1所述的构建适用于双光子荧光显微镜活体实时成像的缺血性脑卒中模型的方法，其特征在于，所述实验动物选自小鼠、大鼠或仓鼠中任意一种； 优选地，所述透明材料选自盖玻片、聚二甲基硅氧烷、聚甲基丙烯酸甲酯或硅水凝胶中任意一种。 3.根据权利要求1或2所述的构建适用于双光子荧光显微镜活体实时成像的缺血性脑卒中模型的方法，其特征在于，所述饲养的时间为20～30天； 优选地，所述孟加拉红的剂量为40～80mg/kg。

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