科创中国
高产细菌素的副干酪乳杆菌基因工程菌株的构建方法
发布时间: 2023-06-30
来源: 科技服务团
基本信息
合作方式：
技术转让
成果类型：
实用新型专利
行业领域：
科学研究和技术服务业
成果介绍
高产细菌素的副干酪乳杆菌基因工程菌株的构建方法，涉及一种副干酪乳杆菌基因工程菌株的构建方法。本发明是要解决现有副干酪乳杆菌的细菌素产量低的问题。方法：一、从副干酪乳杆菌***中扩增prcK基因；二、构建质粒pMD18?T?prcK；三、构建重组过表达载体pRSFDuet?1?prcK；四、构建重组过表达载体pRR?tet；五、将过表达载体pRR?tet电转化副干酪乳杆菌***感受态细胞；六、prcK基因过表达突变株的筛选和鉴定。该基因工程菌株的抑菌能力比原始菌株提高了***％。传代后发酵液细菌素效价***±***，传代后效价比较稳定。本发明用于产细菌素。
成果亮点
本发明构建了prcK基因过表达基因工程菌株，利用电转化方法转入了感受态细胞中，通过荧光定量PCR方法测定突变株prcK基因的mRNA表达水平时发现，prcK基因过表达菌株均比原始菌株的基因表达量高；利用SDS-PAGE和Westernblot分析检测过表达菌株相应基因蛋白的表达时发现，在50kDa处出现目的条带，为prcK基因编码的组氨酸蛋白激酶，而原始菌株在相应位置未出现条带。同时prcK基因过表达菌株分别比原始菌株蛋白表达提高***％，较预期(110％)提高了***％，其抑菌能力比原始菌株提高了***％。传代后发酵液细菌素效价为***±***，传代后效价比较稳定，说明菌株具有良好的遗传稳定性。本发明关于基因过表达基因工程菌株的构建的研究将为今后基因功能的研究和细菌素的生产提供理论了依据。
团队介绍
黑龙江大学（Heilongjiang University），位于黑龙江省哈尔滨市，是黑龙江省人民政府和中华人民共和国教育部、国家国防科技工业局共建的省属综合性大学，黑龙江省“双一流”建设国内一流大学A类高校，入选国家卓越法律人才教育培养计划、中西部高校基础能力建设工程、特色重点学科项目、国家建设高水平大学公派研究生项目、中国政府奖学金来华留学生接收院校、全国深化创新创业教育改革示范高校、教育部来华留学示范基地，是世界翻译教育联盟、中俄新闻教育高校联盟、中俄综合性大学联盟、上海合作组织大学、“一带一路”智库合作联盟成员单位。
成果资料
产业化落地方案
成果综合评价报告
评价单位：“科创中国”黑龙江科技服务团 (黑龙江省科学技术协会) 评价时间：2023-11-07
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