科创中国
一种植物双靶点CRISPR/Cas9载体及其构建方法和应用
发布时间: 2023-05-23
来源: 科技服务团
基本信息
合作方式：
技术转让
成果类型：
发明专利
行业领域：
生物与新医药技术,现代农业技术
成果介绍
本发明公开了一种植物双靶点CRISPR/Cas9载体及其构建方法和应用，首先克隆sgRNA表达框，通过同源重组把sgRNA表达框插入psgR-Cas9-At载体，得到串联两个sgRNA表达框的中间载体；然后通过酶切连接把sgRNA表达框和Cas9表达框插入pBI121载体，得到pBI121-Cas9；随后把sgRNA表达框中的Bpi I酶切位点改造成多克隆位点，得到pBI121-MCS-Cas9；再设计包含两条sgRNA的引物，以串联两个sgRNA表达框的中间载体为模板进行PCR；最后通过同源重组把上一步的产物连入pBI121-MCS-Cas9中。通过上述制备方法可制备得到所述植物双靶点CRISPR/Cas9载体，以pBI121载体为骨架载体，依次连接有sgRNA表达框1、sgRNA表达框2和Cas9表达框。
成果亮点
本发明公开了一种植物双靶点CRISPR/Cas9载体及其构建方法和应用，首先得到串联两个sgRNA表达框的中间载体；然后得到pBI121?MCS?Cas9；再设计包含两条sgRNA的引物，以所述中间载体为模板进行PCR；最后通过同源重组把PCR产物连入pBI121?MCS?Cas9中。通过上述制备方法可制备得到所述植物双靶点CRISPR/Cas9载体，以pBI121载体为骨架载体，依次连接有sgRNA表达框1、sgRNA表达框2和Cas9表达框。本发明的方法提高了双靶点CRISPR/Cas9载体构建的效率，获得所述中间载体和所述pBI121?MCS?Cas9载体后，仅需设计一对引物进行一步PCR和一步同源重组即可成功构建双靶点CRISPR/Cas9载体，方便快捷。另外，本发明一次反应仅需20元，只需合成带接头的一对引物，不需额外的引物及其他试剂，显著降低了成本。
团队介绍
荆楚理工学院（Jingchu University of Technology）简称“荆楚理工”，位于湖北省荆门市，学院于2007年3月经教育部批准由初创于1956年的沙洋师范高等专科学校和始建于1984年的荆门职业技术学院合并组建而成， [2] 是一所省属公办全日制普通本科高等学校，为湖北省首批地方本科院校转型发展试点学校、“湖北省2011计划”首批牵头高校，“实行“省市（荆门）共建、以省为主”的管理体制。
截至2022年3月，学院占地面积2400余亩，校舍建筑面积***余万平方米；设有16个教学学院（部），开设本科专业43个，专科专业15个，涵盖理、工、农、医、文、教、管、艺等8大学科门类；在编教职工1134人，有教授、副教授等高级职称人员342人，博士、硕士678人。享受国务院及湖北省政府特殊津贴的专家4人；有全日制普通在校生19615人，其中本科生13998人。
成果资料
产业化落地方案
成果综合评价报告
评价单位：- (-) 评价时间：2023-11-10
微信公众号
下载app
Copyright © 2022 中国科学技术协会 版权所有 | 京ICP备16016202号-20
京公网安备 11010202008974号