氨甲蝶呤是恶性肿瘤治疗中的第一个有效的抗代谢药,是目前肿瘤治疗中应用最广泛的叶酸拮抗剂,能竞争性地结合二氢叶酸还原酶,抑制核苷酸代谢,从而阻断DNA的合成,特异性地杀伤增殖期细胞。虽然MTX已成为肿瘤治疗的常用药物,但长时间的用药会导致肿瘤细胞获得耐药性,使治疗效果不佳。DHFR基因扩增,酶水平升高,是导致肿瘤对MTX产生耐药的重要机制。
位于染色体外的双微体(DMs)是基因扩增的主要遗传学标志及主要载体。癌基因和耐药基因以DMs形式发生扩增会导致基因的表达量增高,进而促进细胞的恶性转化、肿瘤恶性进程及耐药。肿瘤的进展及获得耐药的过程是肿瘤基因组进化的过程,然而在肿瘤获得耐药的过程中,DMs是如何从无到有进化演变的,又是如何驱动肿瘤获得耐药的,目前尚不明确。DMs是由扩增子相互连接环化的而成,并与DNA双链断裂(DSBs)修复密切相关,断裂点处连接序列的特征是推断扩增子形成机制的重要依据,然而DMs扩增子在分子水平的形成机制,目前尚不明确。因此亟需一种MTX耐药肿瘤细胞扩增子的进化和形成机制分析方法来改变这一现状。
哈尔滨医科大学坐落在北国冰城哈尔滨,是一所历史文化底蕴深厚的医学高等学府,由我国现代医学先驱伍连德博士于1926年创办的滨江医学专门学校(1938年更名为哈尔滨医科大学)和前身为中国共产党于1931年在江西瑞金创建的中国工农红军军医学校原兴山(现鹤岗市)中国医科大学第一、二分校组建而成。学校历经97年的发展建设,传承伍连德博士“赤诚爱国、自强创业”的精神,发扬中国工农红军军医学校“政治坚定、技术优良”的光荣传统,秉承“木直中绳、博学载医”的校训,综合实力不断增强,具有相当的发展规模和鲜明的办学特色。学校是部委省共建大学、黑龙江省国内一流大学建设高校、中俄医科大学联盟中方牵头单位、国家理科基础科学研究与教学人才培养基地、教育部首批试办七年制高等医学教育院校、教育部高水平公共卫生学院建设高校。
评价单位:“科创中国”黑龙江科技服务团 (黑龙江省科学技术协会)
评价时间:2023-11-10
综合评价
技术前景广阔,具备技术成果转移转化要求。
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评价单位:“科创中国”黑龙江科技服务团 (黑龙江省科学技术协会)
评价时间:2023-03-13
综合评价
本实施例中,Sanger测序验证的实施方式为取新的1.5ml Eppendorf管,称量空管重量,在紫外灯下用干净锋利的刀片切下琼脂糖凝胶电泳后的目的DNA条带,移入新的1.5ml Eppendorf管中,称量后减去空管质量即获得凝胶的净重,按照每100mg凝胶加入300μl QG Buffer进行换算,分别在管内加入相应体积的QG Buffer,50℃水浴10分钟,每2~3分钟涡旋溶液一次,直至凝胶完全溶解,将完全溶解的溶液转移至过滤柱内,由于柱内的最大体积为700μl,因此需要进行多次转移,室温下13000转/分离心1分钟,弃废液,再次加入500μl QG Buffer,室温下13000转/分离心1分钟,加入750μl PE Buffer,室温静置5分钟,室温下13000转/分离心1分钟,将柱子转移至新的1.5ml Eppendorf管中,加入50μl EBBuffer,室温静置4分钟,室温下13000转/分离心1分钟,此时离心管内液体即为洗脱下来的DNA。
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