科创中国

生物与新医药技术,医药生物技术

本技术在Sf9昆虫细胞中建立了一个以VP-EL222为基础的光控基因表达系统，将C120-EL222光控系统的元件和荧光蛋白报告基因巧妙地整合到一个昆虫细胞表达载体上，从而使光控系统效能的测试更加快速而稳定，使昆虫细胞中外源蛋白表达的调控更加灵活。我们首次在昆虫细胞中成功实现了C120-EL222系统的光控表达，扩展了该光控系统适用范围。 本技术的目的在于提供了一种应用于昆虫细胞的光控表达载体pMIB-C120-MCS-GFP-EL222，所述载体的核苷酸序列为SEQ ID ***所示，该载体巧妙地整合了C120-EL222光控系统的调控元件和荧光蛋白报告基因，利用opIE1组成性启动子调控GFP报告基因串联EL222转录因子的表达；利用光控调节启动子C120DNA序列调控外源基因的表达，提高了这种光控系统的灵活性和易操作性。同时，该载体还保留了杀稻瘟菌素抗性基因，可用于筛选光控表达的稳定细胞系，新引入了GFP报告基因，便于实时监控载体的转染效率，以及通过基于绿色荧光标记的流式细胞仪快速高效分选光控表达的稳定细胞系。

1.将C120-EL222光控系统的元件巧妙地整合到一个昆虫细胞表达载体，提供了一种质粒构建的范式。 2首次在昆虫细胞中实现了该C120-EL222光控系统的光控表达应用，扩展了该光控系统新的适用范围。 3.将原C120-EL222光控系统的元件由多质粒携载简化为单质粒携载，极大提高了转染后效应细胞的阳性比率，也使得该光控系统的测试更加快速而稳定。本光控系统工作的测试指标为：蓝光诱导后，在有绿色荧光蛋白GFP表达的Sf9细胞中，可通过检测红色荧光蛋白mCherry的表达来反映光控元件的工作效能。 4.在光控质粒中引入组成型表达GFP报告基因，便于通过绿色荧光标签的流式细胞仪进行阳性细胞筛选，大大提高了筛选稳定光控细胞系的效率。

中国科学院武汉物理与数学研究所研究员 徐富强，男，博士，研究员，1983年获兰州大学学士学位；1994和1998年从美国肯塔基大学分别获得化学和生理学双博士学位；1998-2001，耶鲁大学医学院博士后。博士导师兼耶鲁大学磁共振研究中心客座研究员。主要利用磁共振脑功能成像、分子生化、电生理和动物行为方法研究基础嗅觉系统神经生物学和神经科学，及其与重大疾病之间的关系。国际学术期刊上发表论著20余篇，IF > *** 的他人引用近100次。2007年入选中科院“百人计划”；2007年获“国家杰出青年科学基金”。