科创中国

生物与新医药技术,轻工和化工生物技术

本发明涉及一种生产莽草酸的重组菌,表达调控细胞不对称分裂的靶点基因和调控莽草酸生产的靶点基因;调控细胞不对称分裂的靶点基因包括编码细胞骨架蛋白PopZ的基因popZ,调控莽草酸生产的靶点基因包括编码DAHP合成酶的基因aroG,编码3 脱氢奎宁酸合酶的基因aroB和编码转酮醇酶的基因tktA。本发明的重组菌实现了从头合成莽草酸,底物为葡萄糖,价格低廉,且该菌株在***发酵罐发酵后,莽草酸最高产量为***,得率为***,生产强度为***。

(1)以商业化质粒pTargetF(Addgene Plasmid#62226)为基础，采用全质粒PCR的方式，在rrnB T1终止子后插入T7Te终止子序列，以减少泄露表达；进一步地，采用全质粒PCR的方式，去除sgRNA表达框，获得仅含有Pj23119组成型启动子和双终止的工程质粒pJ01； (2)以大肠杆菌MG1655基因组为载体，分别扩增获得含有B0034RBS 的aroBopt、aroGfbr、tktA片段，将aroBopt片段采用多片段一步同源重组的方式，插入至PJ01的表达框中，获得PJ01-B质粒，以相同的方法，将aroGfbr、 tktA两个片段采用多片段一步同源重组的方式，插入至PJ01的表达框中，获得PJ01-GAB质粒；

发明人： 刘立明 丁强 陈修来 高聪 郭亮 胡贵鹏 刘佳 江南大学是教育部直属、国家“211工程”重点建设高校和“双一流”建设高校。学校具有悠久的办学历史、厚重的文化积淀，源起1902年创建的三江师范学堂，历经国立中央大学、南京大学等发展时期；1958年南京工学院食品工业系整建制东迁无锡独立建校，成立无锡轻工业学院；1962年无锡纺织工学院并入无锡轻工业学院；1995年更名为无锡轻工大学；2001年无锡轻工大学、江南学院、无锡教育学院合并组建江南大学；2003年东华大学无锡校区并入江南大学。

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