科创中国

生物与新医药技术

本发明公开了一种与百草枯特异性结合的核酸适配体PQ‑15及其应用，所述的核酸适配体是单链DNA，由68个核苷酸组成,适配体碱基序列为：5′‑ACCGACCGTGCTGGACTCTCGCGCAGCGCCGAGT CCGAACTGGGTGGGGAGTATGAGCGAGCGTTGCG‑3′(68bp)；可将本发明所述核酸适配体PQ‑15可作为百草枯的识别分子，以阳离子化合物聚集的纳米金作为传感信号，首次建立了基于核酸适配体识别的百草枯农药比色检测新方法，其最低检测限为***，其它竞争性靶标对百草枯检测无明显干扰，实际样品中百草枯的加标回收率为***％～***％。此检测方法的优势在于构建方便、快速可肉眼辨别、灵敏度高所需时间短、低成本且易操作。可广泛应用于实际样品中百草枯残留的快速检测。

1、本发明采用体外合成一条生物素修饰的碱基序列，通过氢键与随机文库3′-末端进行互补配对，将其固定在链霉亲和素修饰的纳米磁珠上。随后加入不同浓度的百草枯靶标进行孵育，通过洗脱得到百草枯的亲和性ssDNA，对其进行非对称PCR扩增后得到下一轮筛选所需的富集ssDNA库。经过9轮筛选后将所得亲和性ssDNA进行克隆测序，最后得到15条百草枯的亲和ssDNA序列。对亲和性序列进行聚类分析和二级结构预测，再根据同源性等条件从中挑选出6条ssDNA序列进行亲和力测定，结果表明PQ-15 序列对百草枯的亲和力最高，其对靶标的解离常数(Kd)为54±4nmol/L。 2、本发明将所述与百草枯特异性结合的核酸适配体PQ-15作为百草枯的识别分子，以阳离子化合物聚集的纳米金作为传感信号，首次建立了基于核酸适配体识别的百草枯农药比色检测新方法，其最低检测限为*** nmol/L，其它竞争性靶标对百草枯检测无明显干扰，实际样品中百草枯的加标回收率为***％～***％。此检测方法的优势在于构建方便、快速可肉眼辨别、灵敏度高所需时间短、低成本且易操作。可广泛应用于实际样品中百草枯残留的快速检测。

团队由贵州各高校师生组成固定团体，目前约120人，下设综合部、自科项目与平台管理部、社科项目与平台管理部、成果与知识产权管理部。成果与知识产权管理部：1.负责收审、查验、评定、核算的科研成果积分和奖励。2.负责对外产学研合作和成果转移转化等工作。3.负责科研成果汇编及数据信息的保密管理、存档。团队重管理、讲效率，团队纪律严格、明确责任、不懈努力、开拓进取，为增强团队每一个成员的的创新能力，团队定期开展研讨交流会，在研讨交流中拓宽成员思路，在团建活动中凝聚团队力量。