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本发明属于蛋白分离纯化技术领域，具体涉及一种大规模快速分离纯化rhTNK‑tPAI/II型的方法。本发明提供了一种适合分离rhTNK‑tPAI/II型的层析方法，使得分离同等量的rhTNK‑tPAI/II型的层析时间较公开技术减少50％以上，实现了短时间内高效处理和大规模制备rhTNK‑tPAI/II型的目标。分离后的rhTNK‑tPAI型冻干成品经SDS‑PAGE检测I型比例＆gt;95％，比活为***×105IU/mg；rhTNK‑tPAII型冻干成品经SDS‑PAGE检测II型比例为100％，比活为***×105IU/mg。 本发明属于蛋白分离纯化技术领域，具体涉及一种大规模快速分离纯化rhTNK‑tPAI/II型的方法。本发明提供了一种适合分离rhTNK‑tPAI/II型的层析方法，使得分离同等量的rhTNK‑tPAI/II型的层析时间较公开技术减少50％以上，实现了短时间内高效处理和大规模制备rhTNK‑tPAI/II型的目标。分离后的rhTNK‑tPAI型冻干成品经SDS‑PAGE检测I型比例＆gt;95％，比活为***×105IU/mg；rhTNK‑tPAII型冻干成品经SDS‑PAGE检测II型比例为100％，比活为***×105IU/mg。