本发明公开了一株利用葡萄糖发酵产β丙氨酸的基因工程菌,敲除保藏号为CGMCCNO:2301菌株中苹果酸合成酶和异柠檬酸裂解酶的编码基因aceBA,致其失活,并将L冬氨酸酶和L天冬氨酸脱羧酶所分别编码的基因插入到aceBA基因的位置上,得到大肠杆菌AL12;将烟酸转磷酸核糖激酶基因pncB克隆到表达质粒上,得到重组质粒,将该重组质粒转化大肠杆菌AL12,即得到利用葡萄糖发酵产β丙氨酸的基因工程菌AL13。本发明实现了L天冬氨酸酶和L天冬氨酸脱羧酶的组成型高活性表达,并完全采用可再生生物质资源葡萄糖为原料发酵制备β?丙氨酸的路线,该路线绿色、环保。