本发明公开了一类基于“双响应”机制一氧化氮荧光探针的分子设计及制备方法,其结构可由通式(Ⅰ)表示。其中Spacer表示单键、炔键、噻吩或取代芳基单元;Ar表示芳基、取代芳基、杂环芳基或取代芳基胺中的一种,其中取代基可以是亲水的醚链、磺酸基或季铵盐等中的一种。本发明的探针分子合成的关键步骤可通过Suzuki偶联或C?H活化偶联等反应实现。本发明的探针分子具有灵敏度高、选择性好、响应时间短、膜透性好、背景噪音低、可直接观察、荧光和紫外可见光谱双波段响应等优点,是一类全新的传感检测平台,具有良好的应用前景。