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本发明公开了一种鉴别半夏品种资源的方法，包括基因组DNA提取、PCR扩增18SrDNA序列和序列测定与分析的步骤，其中半夏基因组DNA的提取采用将一定量待测半夏样品的新鲜叶片组织放入离心管中，再加入温水预热后的适当体积配比的SDS与CTAB混合抽提液，混摇5min，用移液枪的枪头伸入上述离心管底部，缓慢顺时针旋转挑取丝状粘稠物质，获得基因组DNA，然后采用植物18SPCR引物18SF和18SR进行18SrDNA序列PCR扩增，随后测序，在NCBI的GenBank数据库中比对分析，从而判断其进化关系与种属来源。本发明的方法快速有效、简单便捷、可操作性强，能够准确鉴定半夏种属来源，确定道地半夏药材资源，为保护半夏种质多样性奠定理论基础，具有较大的应用价值。