科创中国

技术领域

本发明属于分子遗传学领域，涉及绵羊单核苷酸多态性(SNP)分子标记的筛选

与检测，特别涉及利用 PCR-SSCP 方法快速检测 NELF 基因组第 454 位点单核苷酸

多态性。具体来说，就是对 PCR 扩增获得的产物变性之后进行聚丙烯酰胺凝胶电

泳，然后根据电泳结果确定其单核苷酸多态性。

背景技术

近 20 年来，尤其是近 10 年来，分子遗传学和分子生物技术有了突飞猛进的

发展，其中，分子遗传标记是目前在家畜育种中研究得最多的内容，也是近期内

最可能在家畜育种中得到广泛应用的研究项目。遗传标记是指那些可以准确鉴别

的、能反映个体特异性的遗传特征。分子遗传标记则是指以个体遗传物质即核苷

酸序列变异为基础的 DNA 分子标记，是 DNA 水平遗传多态性的直接反映。利用

分子标记辅助选择育种，是现代动物分子育种的一项主要研究内容，其直接在

DNA 水平上对性状的基因型进行选择，因此其选种的准确性大大提高，克服了传

统动物育种方法的缺陷。

单核苷酸多态性(SNP)是一种重要的分子遗传标记，它是由美国学者 Lander

于 1996 年提出的第三代 DNA 遗传标记，是基因组中单个核苷酸变异引起的 DNA

序列多态性，包括碱基的转换、插入及缺失等形式。PCR-SSCP 技术的基本原理是

PCR 扩增后的 DNA 片段经变性成单链 DNA，单链 DNA 在中性聚丙烯酰胺凝胶中

电泳时形成不同的立体构象，其构象直接影响泳动速率，相同长度的 DNA 单链

其核苷酸顺序仅有单个碱基的差别，就可以产生立体构象的不同，造成泳动速率

的不同，产生不同的泳动带。因此，可以通过 PCR-SSCP 技术检测基因组是否存

在 SNP 位点，并且准确的鉴别 SNP 位点的基因型。现在已经公认单链构象多态性

(SSCP)可作为遗传标记应用于育种中。该方法不仅具有 DNA 测序法的准确性，又

克服了费用昂贵、繁琐操作、假阳性的缺点，而且检测序列位点无特殊要求。

鼻胚胎促黄体激素释放激素因子(Nasal embryonic LHRH factor，NELF)编码基

因与动物的生殖有密切关系。Samuel *** 等通过创建纯合 NELF 敲除(KO)

小鼠模型，证明雌性小鼠 NELF 基因敲除将推迟阴道口开放，并没有延迟第一次

发情的时间，减少了子宫重量并且减少了 GnRH 的神经元数目。与此相反，雄性

小鼠的青春期表现正常。NELF 敲除导致雌雄小鼠都表现为生育能力受损，平均窝

产仔数降低。此外，越来越多的报道表明，NELF 在小鼠的生殖方面有重要作用。

绵羊的 NELF 基因定位在第 20 号染色体上，全长 5928bp，编码区全长 1112bp。

目前，国内外对 NELF 基因多态性的研究主要集中于小鼠等模式动物，而对

于家畜 NELF 基因单核苷酸多态性的研究尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用 PCR-SSCP 快速检测绵羊 NELF 基因单核苷酸

多态性的方法及其应用，从而为绵羊的分子标记辅助选择育种提供基础资料，加

快中国绵羊的种质资源改良工作。