本发明提供了一种从陇蜀杜鹃叶中提取并分离棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和 金丝桃苷的方法,属植物有效活性成分提取分离技术领域.本发明将陇蜀杜鹃叶粉碎后,先用石油醚进行热回流以除去色素及脂溶性杂质;再用乙醇溶液浸提,过 滤,得粗提取物;粗提取物用水溶解后,经聚酰胺柱层析分离,乙醇溶液洗脱,并分别收集流出液,浓缩,无水乙醇结晶,95%乙醇重结晶,得到棉花皮素-3- O-β-D-半乳糖苷(收率为***%~***%)和金丝桃苷(收率为***%~***%).高效液相色谱分析表明,分离棉花皮素-3-O-β-D-半乳 糖苷和金丝桃苷纯度为90%~98%.